Translocación bacteriana asociada al incremento de citocinas tipo Th1/Th2/Th17, alteraciones de la barrera intestinal y disbiosis de la microbiota durante la colestasis experimental

Abstract

Introducción. La translocación bacteriana (TB) en pacientes con cirrosis es un detonante de peritonitis bacteriana y septicemia, con una tasa de mortalidad del 30-50%. La TB, ha sido demostrada en modelos experimentales de fibrosis hepática. En el modelo de ligadura del ducto biliar (LDB) la TB se presenta desde la 24 horas de daño hepático. Sin embargo, la dinámica de citocinas tipo TH1/TH2/TH17 en intestino no ha sido investigada y se considera un novedoso campo de estudio. De igual manera, existe escasa información de la composición de la microbiota intestinal, moléculas responsables de la integridad del epitelio intestinal como ocludina y mucinas en este modelo experimental. Objetivo. Evaluar la translocación bacteriana asociada a la expresión de citocinas tipo TH1/TH2/TH17, así como las alteraciones en la integridad de la barrera intestinal y disbiosis de la microbiota durante la colestasis experimental. Material y métodos. Las ratas Wistar macho fueron sacrificadas a los 8 y 30 días posteriores a la LDB. El análisis histológico de hígado e intestino se realizó con la tinción tricromica de Masson y hematoxilina y eosina, respectivamente. La TB se detectó mediante cultivos microbiológicos. La carga bacteriana se evaluó mediante la detección de Escherichia/Shigella por qPCR en contenido fecal. La composición de la microbiota en heces, nódulos linfáticos mesentéricos e hígado se determinó por pirosecuenciación GS-Junior 454. En extractos de proteínas totales de intestino se evaluó T-bet, IFN-γ, GATA-3, IL-4, ROR-γ e IL-17 por Western Blot. La expresión de ocludina en intestino fue analizada por inmunohistoquímica. La capa de moco intestinal se evaluó mediante la tinción azul de alcian e inmunohistoquímica para mucina- 2. Resultados. La TB fue detectada en nódulos linfáticos mesentéricos e hígado desde los 8 días de LDB. La sobrecarga bacteriana de Escherichia/Shigella fue detectada a los 8 (p