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https://hdl.handle.net/20.500.12104/98126Registro completo de metadatos
| Campo DC | Valor | Lengua/Idioma |
|---|---|---|
| dc.contributor.author | González Ochoa, Salvador | |
| dc.date.accessioned | 2024-03-11T18:50:02Z | - |
| dc.date.available | 2024-03-11T18:50:02Z | - |
| dc.date.issued | 2022-04-08 | |
| dc.identifier.uri | https://wdg.biblio.udg.mx | |
| dc.identifier.uri | https://hdl.handle.net/20.500.12104/98126 | - |
| dc.description.abstract | Introducción. El cáncer de próstata (PCa) es una de las neoplasias con mayor incidencia y mortalidad en hombres. Los estadios avanzados de la enfermedad suelen tener nula respuesta al tratamiento, además de desarrollar resistencia a la quimioterapia. El eje IL6R/STAT-3 tiene un rol fundamental en los procesos de proliferación, angiogénesis, metástasis y evasión de la respuesta inmune en PCa. TIGIT representa un punto de control sobre la respuesta mediada por células NK en cáncer, por lo que la vía STAT-3 y TIGIT son blancos terapéuticos potenciales. Objetivos. Evaluar el efecto de los inhibidores dirigidos contra estos blancos terapéuticos sobre la función de células NK frente a células de PCa. Material y Métodos. Se analizó por citometría de flujo en células PCa (22Rv1, LNCaP y DU145) la secreción de citocinas, factores de crecimiento y expresión de ligandos. La expresión del eje IL6R/STAT-3 fue evaluado mediante Western blot. En células NK-92, evaluamos los efectos de stattic y tocilizumab sobre los receptores de NK por citometría. Se evaluó el efecto de los inhibidores contra IL6R/STAT-3 y TIGIT sobre la citotoxicidad de células NK-92 frente a células DU145 a través de la plataforma xCELLigence. Resultados. Células DU145 secretan abundantemente M-CSF, VEGF, IL-6, CXCL8, TGF- β. Además, se encontró un aumento en la expresión de CD155 conforme a la progresión tumoral. Finalmente, se observó que la inhibición del eje IL6R/STAT-3 junto al bloqueo de TIGIT incrementan la citotoxicidad de las células NK-92 contra las células DU145 a través de un aumento en la expresión de NKp46 y la producción de sFasL, granzima A, granzima B y granulisina. Conclusiones. El bloqueo de la vía IL-6R/STAT-3 y TIGIT incrementa la actividad citotóxica de las células NK frente a células de PCa resistentes a la castración, la regulación de estas vías puede representar un blanco terapéutico en PCa avanzado. | |
| dc.description.tableofcontents | contenido Índice de figuras................................................................................................................XI Índice de tablas ............................................................................................................... XII Tabla de abreviaturas..................................................................................................... XIII Introducción............................................................................................................................1 1. Antecedentes.......................................................................................................................2 1.1 Próstata..........................................................................................................................2 1.2 Carcinogénesis..............................................................................................................3 1.3 Factores de riesgo .........................................................................................................4 1.4 Epidemiología...............................................................................................................7 1.5 Clasificación .................................................................................................................9 1.6 Fisiopatología................................................................................................................9 1.7 Tratamientos actuales contra el cáncer de próstata.....................................................11 1.8 Inmunoterapia en cáncer de próstata...........................................................................11 1.9 Inhibidores de puntos de control en cáncer de próstata ..............................................12 1.10 Eje IL-6/IL6R ...........................................................................................................13 1.11 Proteínas STAT y cáncer ..........................................................................................16 1.12 STAT-3 .....................................................................................................................17 1.13 Respuesta inmune innata en cáncer ..........................................................................21 1.14 Células NK................................................................................................................21 1.15 Células NK en cáncer de próstata .............................................................................24 1.16 TIGIT en células NK ................................................................................................26 2. Planteamiento del problema .............................................................................................30 3. Hipótesis...........................................................................................................................31 4. Objetivos...........................................................................................................................32 4.1 General........................................................................................................................32 4.2 Particulares..................................................................................................................32 5. Diseño metodológico........................................................................................................33 5.1 Diagrama metodológico..............................................................................................33 Pág.VIII 5.2 Tipo de estudio............................................................................................................33 5.3 Sede de estudio ...........................................................................................................33 5.4 Universo de estudio ....................................................................................................33 5.5 Líneas celulares...........................................................................................................37 5.6 Cultivo celular.............................................................................................................37 5.7 Inhibición de STAT-3 e IL6R en células de cáncer de próstata y NK-92 ..................38 5.8 Bloqueo de TIGIT en células NK-92..........................................................................38 5.9 Determinación de IL6R, STAT-3 total y fosforilado..................................................38 5.10 Determinación de ligandos (CD155, CD112, MICA, MICB, ULBP1-2-5-6, PDL-1 y B7-H6) ..............................................................................................................................39 5.11 Determinación de TIGIT, CD226, NKp30, NKp44, NKp46 y NKG2D en células NK-92 ...............................................................................................................................40 5.12 Determinación de factores de crecimiento, citocinas en células de cáncer de próstata y de moléculas involucradas en la citotoxicidad mediada por NK...................................40 5.13 Evaluación de la citotoxicidad de células NK-92 ante células tumorales de cáncer de próstata mediante xCELLigence.......................................................................................40 5.14 Análisis estadístico ...................................................................................................41 5.15 Financiamiento del proyecto.....................................................................................41 5.16 Consideraciones de bioseguridad..............................................................................41 6. Resultados.........................................................................................................................43 6.1 Células de cáncer de próstata avanzado con resistencia a la castración mantienen un incremento en los factores reguladores de la respuesta inmune de células NK y la activación de STAT-3.......................................................................................................43 6.2 La expresión de CD155, el principal ligando del receptor TIGIT esta incrementado en células de cáncer de próstata avanzado con resistencia a la castración ............................45 6.3 La combinación de Stattic y Tocilizumab permite una mayor desfosforilación de STAT-3 en células de cáncer de próstata avanzado resistente a castración .....................47 6.4 La combinación de Stattic y Tocilizumab disminuye la expresión de TIGIT e incrementa la expresión de NKp46 en células NK-92......................................................50 6.5 El bloqueo de la vía IL6R/STAT-3 en combinación con el anti-TIGIT incrementan la citotoxicidad de células NK-92 contra células de cáncer de próstata avanzado...............52 6.6 El Bloqueo del eje IL6R/STAT-3 y TIGIT incrementa la producción de moléculas citotóxicas contra células de cáncer de próstata resistente a castración ...........................56 Pág.IX 7. Discusión ..........................................................................................................................59 8. Conclusiones.....................................................................................................................62 9. Bibliografía.......................................................................................................................63 10. Anexos............................................................................................................................78 Anexo 1. Niveles de progresión basados en la clasificación de la AJCC.........................78 Anexo 2. Características de líneas de cáncer de próstata..................................................80 Anexo 3.- Características de líneas celulares NK-92 .......................................................82 Anexo 4.- Cultivo celular..................................................................................................84 Preparación del medio RPMI-S....................................................................................84 Pasaje celular................................................................................................................84 Criopreservación...........................................................................................................84 Anexo 5.- Extracción de proteínas....................................................................................85 Preparación de solución RIPA......................................................................................85 Protocolo de extracción de proteínas............................................................................85 Anexo 6.- Cuantificación de proteínas (Método de Folin)...............................................87 Preparación del BSA y curva de calibración................................................................87 Protocolo de cuantificación de proteínas......................................................................87 Anexo 7.- Western blot.....................................................................................................88 Preparación de muestras para carga el sobre el gel ......................................................88 Electroforesis................................................................................................................88 Transferencia del gel a membrana de PVDF................................................................89 Incubación con el anticuerpo primario .........................................................................89 Incubación con el anticuerpo secundario......................................................................89 Anexo 8.- Tinción de Coomasie .......................................................................................90 Preparación de solución fijadora ..................................................................................90 Anexo 9.- Método de stripping.........................................................................................90 Buffer salino Tris (TBS)...............................................................................................90 Solución de stripping....................................................................................................90 Anexo 10.- Evaluación de proteínas mediante In-Cell Western.......................................91 Anexo 11.- Evaluación de receptores de membrana por citometría de flujo....................92 Pág.X Anexo 12.- valoración de moléculas solubles por LEGENDplexTM Multi-Analyte Flow Assay Kit...........................................................................................................................93 Factores de crecimiento................................................................................................93 Citocinas.......................................................................................................................95 NK/CD8+ Panel.............................................................................................................97 Anexo 13.- Análisis de citotoxicidad mediante la metodología xCELLigence................99 | |
| dc.format | application/PDF | |
| dc.language.iso | spa | |
| dc.publisher | Biblioteca Digital wdg.biblio | |
| dc.publisher | Universidad de Guadalajara | |
| dc.rights.uri | https://www.riudg.udg.mx/info/politicas.jsp | |
| dc.subject | Celulas Nk | |
| dc.subject | Celulas De Cancer De Prostata | |
| dc.title | Efecto de la inhibición del eje IL6R / STAT-3 y bloqueo de TIGIT sobre la actividad funcional de células NK frente a células de cáncer de próstata | |
| dc.type | Tesis de Doctorado | |
| dc.rights.holder | Universidad de Guadalajara | |
| dc.rights.holder | González Ochoa, Salvador | |
| dc.coverage | GUADALAJARA, JALISCO | |
| dc.type.conacyt | doctoralThesis | |
| dc.degree.name | DOCTORADO EN CIENCIAS BIOMEDICAS | |
| dc.degree.department | CUCS | |
| dc.degree.grantor | Universidad de Guadalajara | |
| dc.rights.access | openAccess | |
| dc.degree.creator | DOCTOR EN CIENCIAS BIOMEDICAS | |
| dc.contributor.director | Ortiz Lazareno, Pablo | |
| dc.contributor.codirector | Téllez Bañuelos, Martha Cecilia | |
| Aparece en las colecciones: | CUCS | |
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