Monitorización de la presencia adventicia de eventos transgénicos en semillas de soya a resguardar en el Centro Nacional de Recursos Genéticos

Abstract

Monitorización de la presencia adventicia de eventos transgénicos en semillas de soya a resguardar en el Centro Nacional de Recursos Genéticos Iris Valeria Servín Muñoz Director: Dr. Luis Felipe Guzmán Rodríguez Asesor: Dr. Héctor Rangel Villalobos La soya (Glicine max (L.) Merril) es la oleaginosa más importante a nivel mundial debido a su gran contenido de proteína y aceite con un 40% y 20% respectivamente, es un importante cereal utilizado en campañas de alimentación ya que además de su alto contenido de proteína y aceite también contiene diversos fotoquímicos en los que podemos encontrar: Isoflavonas, inhibidores de Tripsina, saponinas, ácido fitico, oligosacáridos que ayudan a un mejor funcionamiento del organismo. Los organismos genéticamente modificados son cualquier organismo vivo, con excepción de los seres humanos, que ha adquirido una combinación genética novedosa, generada a través de uso de técnicas de la biotecnología moderna. El promotor 35s es de gran interés para uso biotecnológico ya que es un promotor constitutivo lo que conlleva una alta expresión. Actualmente se utiliza para impulsar el transgen de tolerancia a herbicidas es por eso que su presencia puede ser usada como referencia para determinar si un producto ha sido modificado genéticamente Existen varias técnicas para la detección de OGM como el ensayo de inmunodetección ligado a enzimas (ELISA), reacción en cadena de la polimerasa (PCR), PCR en tiempo real en esta técnica se puede ver con ayuda de moléculas fluorescentes el momento exacto en el que se amplifica por primera vez la secuencia de interés que en el caso del presente trabajo es el p35S. Material y métodos: La extracción de DNA se realizó en 7 accesiones por triplicado con el método fenol-cloroformo. Después se verifico concentración y pureza de los ácidos nucleicos por espectrofotometría UV a una longitud de onda de 260, 230 y 5 280 nm en el equipo NanoDrop2000, la integridad mediante electroforesis en gel de agarosa al 1% y la ausencia de inhibidores de PCR se confirmó mediante amplificación del gen rbcL por PCR. La detección de OGM se realizó mediante amplificación en tiempo real del gen interno lec y del promotor p35s. Resultados. La concentración de ADN obtenido oscilo en un rango de entre 1,525 a 3,842 ng/µL, la relación A260/280 fue de 2.080 a 2,18 y la relación A260/230 fue de 1.940 a 2,130 En el corrimiento electroforético no se observó degradación del DNA ya que se podían observar bandas definidas en las 21 muestras. Se observó amplificación del gen rbcL en las 21 muestras analizadas. En todas las accesiones, no se detectó la presencia del p35S. Conclusión: No hubo detección del p35s en las 7 accesiones analizadas por triplicado, lo que denota un compromiso para el aseguramiento de la integridad genética del germoplasma a resguardar en el Centro Nacional de Recursos Genéticos.