Efecto de la Pentoxifilina incorporada al tratamiento con Prednisona en la expresión de genes involucrados en la apoptosis de células leucémicas CCRF-SB y blastos de pacientes pediátricos con Leucemia Linfoblástica Aguda

Abstract

La leucemia linfoblástica aguda (LLA) es una enfermedad hemato-oncológica caracterizada por una proliferación maligna de células linfoides bloqueadas en una etapa temprana de la diferenciación linfoide. Pentoxifillyina (PTX) tiene propiedades antitumorales in vivo e in vitro y puede sensibilizar a las células a la apoptosis. En un estudio piloto se evaluaron los efectos de PTX sobre la apoptosis de células leucémicas durante la ventana de esteroides como parte de la fase terapéutic de la inducción a la remisión en pacientes pediátricos con LLA. Los pacientes con LLA fueron divididos en dos grupos de acuerdo al tratamiento empleado como parte de la inducción a la remisión: grupo PRED y grupo PRED+PTX. Se observó un mayor índice de apoptosis después del tratamiento en pacientes tratados con prednisona (PRED) y PTX que los que recién recibieron sólo PRD. Se evaluó el mecanismo molecular de PTX que sensibilizan a las células leucémicas a morir por apoptosis. Realizamos un ensayo piloto controlado fase 1 piloto para evaluar la expresión génica modificada por PTX durante la ventana de esteroides de inducción a la fase de remisión en los pacientes con ALL recientemente diagnosticado. Se aisló el ARNm de las células en cada aspirado de médula ósea (BMA) antes y después del tratamiento y posteriormente se analizó el perfil de expresión génica de la apoptosis por microarrarreglos y q-PCR. Para analizar el posible efecto de la PTX sin la PRD se utilizaron células leucémicas de la línea celular CCRF-SB, las cuales fueron tratadas con PTX, PRED y la combinación de ambos fármacos. Se cuantificó el índice de apoptosis, así como la expresión de genes involucrados con la inducción de muerte celular por q-PCR. Los tratamientos experimentales inducen amplios cambios en el perfil de expresión génica. Los pacientes del grupo control (grupo PRED) sobre-expresaron 377 genes y se subexpresaron 344 en contraste con los pacientes tratados con (PRED + PTX) que mostraron sobreexpresión de 1319 y subexpresaron de 1594. El análisis bioinformático mostró que una de las principales vias de señalización regulada es la apoptosis. Los genes más importantes que se modifican en esta vía son aquellos con actividad proapotótica, la mayoría de ellos sobreexpresados. El tratamiento con PRED+PTX induce la expresión de genes pro-apoptóticos como: TNFAIP3, RIPK1, BNAIP3L, FOX3A, MS4A1, GIMAP5 y GZMB. Otros genes regulados implicados en la apoptosis que se encontraron sobre-expresados tanto por el tratamiento con PRED como PTX por separado fueron CASP8, CFLAR, LTA y NOXA. De la misma manera se encontró la regulación de la vía mitocondrial en la línea celular CCRF-SB En conclusión, la adición de PTX al tratamiento con PRED durante la ventana de esteroides en pacientes con LLA modifica importantemente el perfil de expresión génica y cambia diferentes vías de señal de la célula leucémica. La combinación de ambos fármacos sinergiza la actividad antileucémica de cada fármaco. Esto pudiese representar una alternativa terapéutica apropiada en al futuro para potenciar la terapia antileucémica.