Análisis fenotípico y funcional de subpoblaciones circulantes de células T CD4+ CD28null NKG2D- y CD4+ CD28null NKG2D+ frecuentemente encontradas en cáncer cérvico-uterino

Abstract

La molécula coestimualadora CD28 es un elemento crítico y esencial para el proceso de activación, proliferación y supervivencia de las células T CD4+. En los últimos años se ha reportado en enfermedades autoinmunes e infecciones virales crónicas, la expansión de una población de células T CD4+CD28null –parte de ellas con presencia del receptor NKG2D- con un perfil asociado a citotoxicidad. Paradójicamente en cáncer, se ha reportado una expansión de células T CD4+NKG2D+ con capacidades inmunosupresoras. Recientemente, reportamos la existencia de una población frecuentemente expandida de células CD4+CD28nullNKG2D+ en mujeres con cáncer de cuello uterino. Objetivo: Evaluar el perfil asociado a citotoxicidad o inmunorregulación en subpoblaciones de células T CD4+ definidas por la presencia y/o ausencia de CD28 y NKG2D en pacientes con cáncer cérvico-uterino y mujeres sanas, así como el perfil de citocinas y su capacidad efectora contra células tumorales. Metodología: Mediante un protocolo de citometría de flujo multicolor, se analizó la expresión de marcadores asociados a citotoxicidad e inmunorregulación en subpoblaciones de células T CD4+ definidas por la presencia y/o ausencia de CD28 y NKG2D provenientes de 10 pacientes con cáncer cérvico-uterino y 10 donadoras sanas pareados por edad y género, todas ellas seleccionados en base al porcentaje de células CD4+NKG2D+. Dicho análisis se realizó en estas subpoblaciones en estado basal y tras la estimulación del complejo TCR in vitro. Resultados: Se observó una expansión notable de células CD4+CD28null, muchas de ellas NKG2D+, en las muestras de cáncer de cuello uterino y no en controles. Esta población de células T CD4+CD28null se caracterizó por la ausencia de marcadores asociados a inmunorregulación, así como muy bajos niveles basales de IFN-γ, TNF-α, TGF-β, y IL-10. No obstante, se encontró perforina intracelular y granzima B en prácticamente la mayoría de la población de células CD4+CD28null, siendo las células CD4+CD28nullNKG2D+ las que presentaron porcentajes e intensidad de fluorescencia de perforina más alta. Posterior a la estimulación in vitro con PHA de muestras control, se observó una frecuencia baja de células CD4+CD28null CTLA-4+ con respecto las CD28+. Particularmente las células T CD4+CD28nullNKG2D+, mostraron una disminución de perforina intracelular y un aumento en la producción de TGF-β. Asimismo, el ensayo de estimulación con anticuerpos anti-CD3 y anti-NKG2D mostró que los dos subtipos de células CD4+CD28null pueden ser productoras de IFN-γ. Por otro lado, observamos que la activación de células CD4+CD28null vía complejo TCR inducía la muerte de células derivadas de glioblastoma. Conclusiones: Nuestros datos proporcionan la primera evidencia de un vínculo fuerte entre la ausencia de CD28 y la expresión de perforina, la cual está reforzada por la expresión de NKG2D, dentro de la población de células T CD4+ particularmente aquellas provenientes de pacientes con cáncer de cuello uterino. Asimismo, estas subpoblaciones de células T CD4+CD28nullNKG2D- y CD4+CD28nullNKG2D+ activadas vía complejo TCR poseen mecanismos citotóxicos que podrían ser ejercidos en contra del tumor.