CARACTERIZACION DE LA EXPRESION DEL ARN LARGO NO-CODIFICANTE TUG1 EN EXOSOMAS URINARIOS DE PACIENTES CON GLOMERULOPATIAS

Abstract

TÍTULO: “Caracterización de la Expresión del ARN Largo No-Codificante TUG1 en Exosomas Urinarios de Pacientes con Glomerulopatías” ANTECEDENTES: La disfunción mitocondrial en el podocito es un mecanismo clave en la progresión de algunas glomerulopatías, en particular la nefropatía diabética. Se ha demostrado que mejorar la función mitocondrial a través de estrategias que modifican el número o la actividad de las mitocondrias resulta renoprotector en diferentes modelos de daño renal. El lncARN TUG1 es un regulador de la transcripción de PGC-1α, una proteína encargada de mantener la bioenergética mitocondrial, y su represión en podocitos de ratones diabéticos se ha asociado a una disminución en la función renal. En experimentos donde se rescata la expresión de este lncARN se recuperan también los procesos podocitarios y la estructura de la membrana basal glomerular. Esto sugiere que TUG1 podría actuar como un marcador del estado bioenergético de las mitocondrias en el podocito y que una reducción en sus niveles de expresión podría indicar disfunción aun antes de que se manifiesten cambios irreversibles en el glomérulo. Las evidencias del papel de TUG1 provienen de modelos animales y celulares de nefropatía diabética, por lo que se desconoce si en humanos TUG1 pueda funcionar como un biomarcador de daño en otras glomerulopatías. El diagnóstico de glomerulopatías es complicado y suele realizarse de forma tardía, por lo que es importante desarrollar mejores herramientas de diagnóstico temprano de daño glomerular. Los exosomas urinarios, pequeñas vesículas presentes en la orina y liberadas por todos los tipos celulares que conforman a la nefrona, representan una magnífica oportunidad para observar el estado de los podocitos de forma no-invasiva y podrían convertirse en una alternativa a la biopsia renal. Los exosomas transportan un cargamento de proteínas y ácidos nucleicos que refleja el estado fisiológico de las células de donde se originan. OBJETIVO: Caracterizar la expresión del ARN largo no-codificante TUG1 en exosomas urinarios de pacientes con glomerulopatías y comparar su expresión con marcadores séricos de daño renal. MATERIAL Y MÉTODOS: Se extrajo ARN total de exosomas urinarios obtenidos por ultracentrifugación a partir de muestras de orina de pacientes a quienes se les realizó una biopsia por sospecha de glomerulopatía. La expresión de TUG1 se cuantificó a través de una reacción en cadena de la polimerasa en tiempo real (RT-PCR). Brevemente, 1 g de ARN total se convirtió a ADN copia (ADNc) utilizando el kit QuantiTect Reverse Transcription (QIAGEN) para posteriormente ser amplificado utilizando cebadores específicos para TUG1 y SYBR Green en un termociclador LightCycler96 (ROCHE). La molécula de daño renal 1 (KIM1) se cuantificó en suero por Luminex. La significancia de todos los resultados obtenidos se obtuvo mediante análisis estadístico en SPSS (versión 20.0). RESULTADOS : Se observó tendencia a la disminución en la expresión el ARN largo no codificante en aquellos pacientes con diagnóstico de glomeruloesclerosis focal y segmentaria, así como en aquellos que cursaron con niveles de proteinuria de entre 2 y 4 gramos así como en aquellos con cifras de creatinina de entre 1 y 2 mg/dl, sin ser estadísticamente significativa. Sin embargo con nuestros resultados se abre la puerta para realizar nuevos protocolos con mayor número de pacientes incluyendo un mayor número de controles y una mayor homogeneidad en la muestra