EVALUACIÓN DEL EFECTO DE DOS MÉTODOS DE CRIOPRESERVACIÓN SOBRE EL ENDURECIMIENTO DE LA ZONA PELÚCIDA Y VIABILIDAD DE BLASTOCISTOS BOVINOS PRODUCIDOS IN VITRO

Abstract

Resumen Actualmente las biotecnologías reproductivas como la criopreservación de embriones en ganado bovino mejoran la productividad animal, mediante un aumento en la producción, tasas reproductivas y calidad genética, generando interés económico. Sin embargo, en distintas investigaciones se ha descrito que el proceso de criopreservación genera un endurecimiento de la zona pelúcida, lo cual podría dificultar o impedir la eclosión embrionaria, y de esa manera comprometer su viabilidad. El objetivo del presente estudio fue comparar el efecto de dos métodos de criopreservación (congelación lenta y vitrificación) sobre el endurecimiento de la zona pelúcida y la viabilidad de embriones bovinos producidos in vitro. Tras realizar la producción in vitro de los blastocistos bovinos, se conformaron tres grupos de estudio: un grupo control (blastocistos frescos), el grupo congelación lenta y el grupo vitrificación. El estudio se llevó a cabo en cuatro experimentos, el primero consistió en la criopreservación de los blastocistos por congelamiento lento y por vitrificación; en el segundo experimento se degradaron las zonas pelúcidas de los blastocistos en una solución con pronasa, el proceso se documentó en video y el tiempo de degradación (minutos) se interpretó como el endurecimiento de la zona pelúcida, donde la congelación lenta presentó un mayor endurecimiento (37.14 minutos) en comparación con la vitrificación (14.52 minutos); el tercer experimento fue la evaluación de la reexpansión y eclosión embrionaria post-descongelación/calentamiento a las 24 y 48 horas en la cual no se encontraron diferencias (p > 0.05) para la variable reexpansión, la congelación lenta presentó una mayor tasa de eclosión a las 24 horas (49% y 13% respectivamente) comparada con la vitrificación (36% y 5% respectivamente); en el cuarto experimento los blastocistos fueron teñidos para evaluar el porcentaje de células viables y células no viables, donde la congelación lenta presentó un mayor porcentaje de células viables (91.23%), así como un menor porcentaje de células no viables (8.77%) en comparación con la vitrificación (56.84% y 43.16% respectivamente), y por último, se realizó el conteo de células totales, en donde no se encontraron diferencias (p > 0.05) entre tratamientos. En conclusión, la congelación lenta genera un mayor endurecimiento de la zona pelúcida en comparación con la vitrificación, no obstante, la congelación lenta presenta una mayor viabilidad en blastocistos, comparado con la vitrificación, la cual tiene un efecto negativo en la viabilidad embrionaria; por lo tanto, bajo las condiciones de esta investigación, los resultados obtenidos muestran que el endurecimiento de la zona pelúcida no se relaciona directamente con la viabilidad embrionaria ni con la eclosión post-criopreservación.