Asociación de variantes en genes reguladores de Hemoglobina Fetal con el riesgo en pacientes con leucemia linfoblástica aguda y el análisis conformacional de sus tres formas tetraméricas

Abstract

Resumen La leucemia linfoblástica aguda (LLA) es un trastorno hematológico que afecta principalmente a la comunidad pediátrica. En México se presentan hasta 2,500 nuevos casos por año y en niños hispanos en Estados Unidos de entre 0-14 años, representa hasta el 50% de los casos de cáncer. Algunos pacientes con LLA presentan alteraciones en el nivel de hemoglobina fetal (HbF), lo que se ha relacionado con el pronóstico de esta neoplasia. Variantes en genes reguladores de HbF como el gen que codifica para la subunidad BCL11A del complejo remodelador de la cromatina BAF (BCL11A) (rs66706648, rs7557393, rs4671393, rs11886868, rs766432, rs7599488, rs1427407), el gen que codifica para un tipo de GTPasa traduccional (HBS1L) y el protooncogén del factor que codifica para el factor de transcripción C-MYB (MYB) que flanquean la región intergénica HBS1L-MYB (rs283845, rs7776054, rs9399137, rs489441, rs9402686, rs1320963), el que codifica para el factor de transcripción 1 de tipo krüpel (KLF1) (rs3817621), los propios genes que codifican para la subunidad gamma 2 de la hemoglobina (HBG2) (rs7482144), y el de la subunidad gamma 1 (HBG1) (rs368698783) así como el pseudogen de la subunidad beta 1 de la hemoglobina (HBBP1) (rs10128556) se asocian con aumento en la concentración de HbF y podrían estar relacionados con factores pronóstico de LLA. La HbF se caracteriza, en comparación con la hemoglobina adulta (HbA), por tener mayor afinidad por el oxígeno debido a la baja interacción con el ácido 2,3 bifosfoglicérico (2,3-DPG) que regula la unión de la Hemoglobina (Hb) al oxígeno. La HbF se compone de dos cadenas alfa y dos cadenas globínicas gamma (γG y γA). Las cadenas gamma son altamente homólogas, ambas formadas por 146 residuos, difieren únicamente en el aminoácido 136 donde hay un cambio de glicina en γG por alanina en γA y mantienen una relación de 3:1 (γG:γA) en etapas fetales; mientras que en adultos la relación se invierte 2:3 (γG:γA). La heterogeneidad del tipo de cadena γ disponible para la formación de la HbF permite que se sinteticen distintos tipos de la misma molécula: α2γG2; α2γGγA y α2γA2. En la regulación de HbF y HbA, proceso también conocido como switching, participan diversas moléculas, entre ellas, factores de transcripción, microARNs y algunos otros factores epigenéticos. Entre los principales reguladores de la expresión de HBG2 y HBG1 se encuentran los factores subunidad BCL11A del complejo remodelador de la cromatina BAF (BCL11A) y factor de transcripción 1 de tipo Krüpel (KLF-1) así como HBS1L-MYB además de variantes propias de los genes globínicos. Objetivo: evaluar la asociación de variantes en genes reguladores de HbF con su concentración y el riesgo en pacientes con LLA; así como analizar (in silico) los cambios conformacionales de las tres posibles formas tetraméricas de HbF. Materiales y métodos: Se realizó un estudio transversal analítico en 48 pacientes pediátricos con LLA, y en una población pediátrica de referencia (sin LLA, n=64). A partir de una muestra de sangre se realizaron estudios hematológicos (citometría hemática), bioquímicos (cuantificación de HbF por el método de Singer) y moleculares (genotipificación de variantes en genes reguladores de HbF por qRT-PCR). Los resultados se incluyeron en una base de datos utilizando el programa Excel del paquete Microsoft Office 365®. El análisis de los datos se llevó a cabo con el software de IBM SPSS v22.0. Se realizaron pruebas paramétricas (t de Student o ANOVA) para aquellos datos continuos que se distribuyen de manera normal mediante la prueba de bondad de ajuste Kolmogorov-Smirnov; y pruebas no paramétricas cuando los datos se distribuyen de manera no normal (U de Mann Whitney o Kruskal Wallis); los datos cualitativos se analizaron mediante conteos directos y prueba de χ2. Se tomaron como estadísticamente significantes los valores de p