EVALUACIÓN DE LA EXPRESIÓN E IDENTIFICACIÓN DE LA METILACIÓN DE LOS PROMOTORES DE LOS REPRESORES TRANSCRIPCIONALES ZBTB7A, ZBTB27, ZBTB28 Y HIC1 EN LÍNEAS CELULARES INFECTADAS POR EL VIRUS DEL PAPILOMA HUMANO 16

Abstract

Introducción. El cáncer cervicouterino (CaCu) es la transformación de las células epiteliales del cuello uterino, consecuencia de la integración del genoma del Virus del Papiloma Humano de Alto Riesgo (VPH-AR). La familia de represores transcripcionales ZBTB regulan la expresión génica, no obstante, su sobreexpresión o silenciamiento puede contribuir a la transformación de las células. ZBTB27 actúa como oncogén, mientras que ZBTB28 inhibe su actividad oncogénica. ZBTB7A tiene actividad pleiotrópica según el tipo de cáncer y HIC1 es un gen supresor de tumor. Sin embargo, no existen estudios donde se evalúe la expresión de los ZBTB en un contexto de infección por VPH y CaCu. Objetivo general. Evaluar la expresión e identificar la metilación de los promotores de los represores transcripcionales ZBTB7A, ZBTB28, ZBTB27 y HIC1 en líneas celulares infectadas por el Virus del Papiloma Humano 16. Metodología. Diseño experimental. Se realizó un análisis in silico de los posibles sitios de unión de los represores transcripcionales ZBTB en el genoma de VPH 16. Se procedió a realizar un cultivo celular y extraer el RNA y DNA de las líneas celulares HaCaT, Ect1/E6E7, SiHa y C33A por triplicado. Posteriormente se evaluó la expresión génica mediante RT-qPCR, todas las amplificaciones se realizaron por duplicado y se realizó el análisis de expresión relativa por el método de ΔCq y método de Livak, utilizando como gen de referencia RLP32 y como grupo calibrador la línea celular HaCaT. Finalmente, se identificaron las metilaciones en islas CpG de los promotores de los genes ZBTB7A, ZBTB27, ZBTB28 y HIC1 mediante digestión de DNA con las enzimas HpaII y MspI, PCR punto fina l y electroforesis en gel de agarosa. Resultados. De acuerdo con el análisis in silico, se encontraron 2 posibles sitios de unión para HIC1 dentro de la región larga de control (LCR) del VPH 16, 4 sitios para ZBTB7A en el gen E6, y en el gen E7, 1 sitio para ZBTB7A, ZBTB28 y HIC1. La expresión relativa de ZBTB7A de la línea celular C33A fue de 0.17 0.17 (p