EFECTO DE 17β-ESTRADIOL Y PROLACTINA SOBRE LA MIGRACIÓN E INVASIÓN CELULAR EN UN MODELO DE QUERATINOCITOS HaCaT TRANSDUCIDOS CON E6 Y E7 DE VIRUS DEL PAPILOMA HUMANO 16

Abstract

Introducción: El Virus del Papiloma Humano (VPH) es el principal responsable para el desarrollo del Cáncer Cervicouterino (CaCu), actualmente, es el cáncer ginecológico más frecuente en la población femenina en México y en el mundo. El VPH 16 de alto riesgo es el encargado de ocasionar más del 80% de estos casos. La capacidad de acción de las células infectadas con el VPH es mediada principalmente por las oncoproteínas virales E6 y E7, estas proteínas son capaces de alterar y modificar queratinocitos basales produciéndoles inestabilidad genética. No obstante, se ha demostrado que el mecanismo de infección de VPH requiere de la participación de cofactores exógenos y endógenos para su evolución a cáncer, algunos de ellos se asocian con la acción de hormonas femeninas como el 17β estradiol (E2) y la prolactina (PRL). El desarrollo del CaCu va acompañado de situaciones patológicas con migración e invasión celular debido a alteraciones en las células malignas; pierden tanto la organización como sus uniones intercelulares, reprograman la expresión génica y desarrollan múltiples cambios bioquímicos que producen una capacidad migratoria e invasiva aumentada, dando como resultado la metástasis. Objetivo: Analizar el efecto de E2 y PRL sobre la migración e invasión celular en un modelo de queratinocitos HaCaT transducidos con los oncogenes E6 y E7 de VPH 16. Materiales y métodos: Se utilizaron queratinocitos HaCaT transducidos con los oncogenes E6 y E7 del VPH 16 para evaluar el efecto hormonal en los eventos celulares de migración e invasión mediante el uso de cámaras Transwell. Adicionalmente, se evaluó el efecto hormonal con la expresión de las proteínas: vimentina y α−SMA mediante la técnica de inmunofluorescencia. Los resultados obtenidos se analizaron mediante estadística descriptiva y ANOVA en el programa GraphPad Prism 8, se consideraron significativos los valores de p menores a 0.05 (p < 0.05). Resultados y discusión: Se observó un aumento significativo en la capacidad de migrar e invadir en las células HaCaT transducidas con los oncogenes E6 y E7 de VPH 16 estimuladas tanto con E2 como PRL en comparación con los queratinocitos HaCaT transducidos con el vector viral vacío (pLVX). La movilidad celular más significativa fue con 17β-estradiol en el caso de 10 E6 (p < 0.0001) y prolactina en el caso de E7 (p < 0.0001). La capacidad aumentada para migrar e invadir de las células HaCaT transducidas con los oncogenes E6 y E7 del VPH 16 estimuladas con E2 y PRL puede ser resultado de la capacidad que tienen estas hormonas para inducir la expresión de los oncogenes E6 y E7 del VPH 16 y al efecto positivo que éstos ejercen sobre la expresión de los receptores de estrógeno (ERα, ERβ y GPER) y de prolactina (PRLR). Adicionalmente, ha sido demostrado que los oncogenes E6 y E7 del VPH 16 inducen la localización nuclear de ERα, ERβ y GPER, en donde podrían funcionar como factores de transcripción. Por otra parte, se mostró la inhibición de la movilidad celular con el estímulo mixto (E2 + PRL) con lo que se sugiere que existe un efecto modulador importante entre estas dos hormonas. Los resultados también demostraron que E6 y E7 regulan diferencialmente la expresión de proteínas asociadas a la transición epitelial mesenquimal, la expresión de vimentina aumentó significativamente (p < 0.001) al estar en contacto con las hormonas, mas no la expresión de α−SMA. Los ensayos de inmunofluorescencia comprobaron que existe una sinergia de 17β-estradiol con E6 y prolactina con E7, no obstante, las células transducidas con E6 demostraron un aumento significativo (p < 0.001) en la expresión de vimentina y α-SMA al ser estimuladas con E2. Conclusión: 17β-estradiol y prolactina promueven la migración e invasión de queratinocitos HaCaT transducidos con los oncogenes E6 y E7 de VPH 16. Es importante destacar el efecto de las hormonas sexuales femeninas en la infección por VPH 16 desde etapas tempranas, ya que esta interacción favorece la progresión del cáncer, siendo la metástasis uno de los factores más relevantes clínicamente. Este estudio representa el primer análisis donde se evaluó la acción de los oncogenes E6 y E7 del VPH 16 en conjunto con E2 y PRL en los procesos de migración e invasión. De modo que, estudios posteriores son necesarios para comprender las vías moleculares que se alteran en las células cancerosas impulsando el primer paso de la diseminación metastásica.