ASOCIACIÓN ENTRE LA COMPOSICIÓN DE LA MICROBIOTA INTESTINAL Y LOS METABOLITOS INTESTINALES CON CITOCINAS PROINFLAMATORIAS Y MARCADORES DE ACTIVACIÓN VASCULAR EN PACIENTES CON VIH Y ENFERMEDAD POR HÍGADO GRASO NO ALCOHÓLICO

Abstract

Introducción: La infección VIH afecta a 36,9 millones de personas alrededor del mundo. Con la introducción de la terapia antirretroviral (TARV) la infección con el VIH, se considera una enfermedad crónica y manejable. Sin embargo, la presencia del VIH, la depleción de linfociitos T CD4+ , el daño al GALT, así como la disbiosis y traslocación bacteriana inducen una activación inmune sistémica que resulta en una inflamación crónica de bajo grado, eventos que se han correlacionado al desarrollo de comorbilidades no SIDA entre ellas la esteatosis hepática no alcohólica, misma que se relaciona con un riesgo aumentado de CVD. NAFLD comprende una serie de alteraciones hepáticas en quienes no tienen un consumo significativo de alcohol, que abarca desde esteatosis y esteatohepatitis, hasta grados avanzados de fibrosis, cirrosis y HCC. Los factores metabólicos (obesidad, DM2, dislipidemia, etc.) son la base en la patogénesis. En quienes viven con VIH, la microbiota intestinal ha cobrado relevancia como factor asociado al desarrollo y progresión de enfermedad metabólica, NAFLD y CVD. En PVVIH, se ha reportado un aumento en el filo Proteobacteria, así como una alteración en la relación Firmicutes/Bacteroidetes. En pacientes NAFLD, se ha documentado un incremento en Proteobacteria, Enterobacteria, Escherichia, Bacteroidetes además de Parabacteroidetes y Allisonela, asi como una disminución de Firmicutes. Los componentes funcionales de la microbiota como los SCFA (propionato, butirato, acetato, además de ácido valérico y capróico); tienen un impacto directo en el metabolismo humano y se asocian a un estado inflamatorio persistente. El proceso inflamatorio crónico presente en pacientes con VIH y NAFLD, aunado al proceso disbiótico, condicionan una desregulación en el metabolismo de los BCAAs (valina, leucina e isoleucina), aminoácidos que se han correlacionado negativamente con la sensibilidad a la insulina. Se han descrito numerosos biomarcadores, asociados con NAFLD, entre ellos se encuentra Ox-LDL, la forma soluble de CD36 y el dimero-D, mismos que se asocian al desarrollo de CVD en respuesta a la presencia de mediadores inflamatorios y metabólicos, vinculando así la infección por VIH con el desarrollo de NAFLD y CVD. Objetivo: Determinar la asociación entre la composición de la microbiota intestinal y los metabolitos microbianos, con los niveles plasmáticos de citocinas proinflamatorias y marcadores de activación vascular en pacientes con VIH y con NAFLD. Metodología: Estudio transversal, analítico. Universo de estudio: PVVIH >18 años, en TARV, carga viral indetectable, con síndrome metabólico y con atención médica en la Unidad de VIH/SIDA del Hospital Civil de Guadalajara “Fray Antonio Alcalde” (HCG-FAA). Tamaño de muestra: 118 PVVIH que con base en los resultados de fibrosis por ARFI y esteatosis por USG, se dividieron en 4 grupos: a) Grupo control de PVVIH, b) Fibrosis, c) Esteatosis y d) Esteatosis más fibrosis. Tipo de Muestra: Heces, suero y plasma. Metodos: Se realizó una historia médica, exploración física y medidas antropométricas. Se realizarón laboratoriales generales en el Laboratorio Central del HCG-FAA. En el InIVIH, se realizó la cuantificación de citocinas séricas a través de un ensayo multiplex basado en perlas utilizando el citómetro de flujo Attune NXT. La IL-6, el TNF- así como los marcadores de activación vascular se determinarón por ELISA siguiendo las instrucciones de cada fabricante y las absorbancias se leyerón en el equipo Synergy de Biotek. La caracterización y análisis de la microbiota intestinal se realizó siguiendo el protocolo Illumina 2013 utilizando la plataforma MySeq. Finalmente, los niveles plasmáticos de BCAAs se evaluarón por HPLC en tanto que los niveles de SCFAs en heces se evaluarón por cromatografia de gases. Los BCAAs se determinarón en la Universidad Autónoma de Nuevo Leon (UANL) por pago de servicio y la determinación de las concentraciones de SCFA se llevo a cabo en colaboración con el Centro Universitario de Ciencias Exactas e Ingenierias (CUCEI-UDG). Resultados: La prevalencia de NAFLD fue de 50.84%. Al comparar los cuatro grupos de estudio, se presentarón diferencias significativas en el IMC, circunferencias de cintura y cadera presentando los valores más altos el grupo de esteatosis y fibrosis. Así como en los niveles de hemoglobina, leucocitos, neutrófilos, VLDL, GGT e insulina. En relación a las PFHs, niveles de GGT presentaron significancia estadística, con los niveles más altos en el grupo con esteatosis más fibrosis, seguido del grupo de esteatosis. Al analizar las citocinas en los grupos, se obtuvieron diferencias significativas en las concentraciones de IL-18 e IL-6,. No se encontraron diferencias significativas en las concentraciones de Ox LDL, sCD36 o el dímero D. Sin embargo, al comparar el grupo control vs. grupo esteatosis más fibrosis, hay una elevación significativa de dímero D en este último grupo. Los niveles de Ox-LDL son significativamente más elevados en aquellas PVVIH con mayor grado de esteatosis. No se encontraron diferencias significativas en la concentración de los BCAAs en el grupo control y el grupo con esteatosis; interesantemente, se observó una elevación en la concentración de ácido aspártico y ácido glutámico. El grupo de esteatosis mostró un aumento significativo en la cantidad de propionato en heces en relación al grupo control. Respecto a la microbiota intestinal, el analisis de beta diversidad indicó la presencia de 3 enterotipos predominantes: Bacteroides en un 5%, Firmicutes en un 15%, y un marcado predominio de Prevotella (caracterizando al 80% de las muestras). Mediante la prueba PERMANOVA, se distinguieron dos enterotipos: Firmicutes presente en el 90% y Prevotella presente en el 10% de las muestras. Por abundancia relativa, a nivel de filo predominaron Firmicutes y Bacteroides, seguidos de Proteobacteria en el total de las muestras. En tanto que a nivel de género, hay un predominio de Prevotella, Blautia, Faecallibacterium y Succinivibrio, este último abundante en el grupo de esteatosis y esteatosis más fibrosis. Posterior a la construcción de un core microbiano, se observo que en el grupo control, los géneros Blautia, Ruminicoccus y Dorea fueron los más característicos. En el grupo con fibrosis, predominó Ruminicoccus, Faecalibacterium, Coprococcus y Blautia; en el grupo con esteatosis se encontró principalmente Blautia, Ruminicoccus y Coprococcus; mientras que en el grupo de esteatosis con fibrosis, predominaron Blautia y Ruminicoccus. Conclusión: Con base en nuestros resultados, es evidente la necesidad de una intervencion clínica integral y oportuna para estos pacientes, en quienes coexisten dos condiciones clínicas caracterizadas por una inflamación crónica sistémica, un estado procoagulante, la presencia de una diosbiosis intestinal caracterizada por especies microbianas proinflamatorias a través de la producción de metabolitos microbianos con un impacto directo en salud intestinal.