Clonación, expresión y purificación de la proteína p40 recombinante de Lacticaseibacillus rhamnosus GR-1 y su efecto sobre la integridad de la barrera epitelial de HaCaT frente a estímulos inflamatorios

Abstract

La habilidad de las barreras epiteliales de actuar como la principal línea de defensa contra daños externos se debe uniones estrechas, complejos proteicos que bloquean el espacio paracelular a microorganismos. Cambios en la expresión de las proteínas de estos complejos son consecuencia de alteraciones a la barrera epitelial causadas por metabolitos bacterianos y otros estímulos proinflamatorios. Moléculas derivadas de bacterias con efectos benéficos, como los postbióticos, mejoran la función de barrera al activar vías de supervivencia en células epiteliales. Lacticaseibacillus rhamnosus GG secreta la proteína p40 que protege barreras intestinales a través de la activación del EGFR (Domínguez-Díaz et al., 2023). En este trabajo se clonó, expresó y purificó la proteína p40 recombinante de L. rhamnosus GR-1 para evaluar su actividad biológica y su efecto sobre sobre la viabilidad celular, citotoxicidad, TEER y las uniones estrechas, así como la activación del EGFR por Western blot en queratinocitos HaCaT sometidos a estímulos inflamatorios. Nuestra p40 posee una mutación silenciosa en el residuo 368. Además, después de someterla a distintos procesos de almacenamiento, aún conserva bioactividad. La p40 no reduce la viabilidad celular de células HaCaT, pero si reduce el incremento de citotoxicidad celular inducido por LPS al utilizarla previo a este estimulo. Finalmente se encontró que, aunque los estímulos no provocaron cambios en la expresión de uniones estrechas, p40 incrementa la expresión de ocludina en HaCaT, aunque no incrementa la activación del EGFR. Esto sugiere que esta p40 mejora la función de barreras epiteliales a través de vías de señalización distintas.