1. RIUdeG
  2. Tesis
  3. Doctorado
  4. CUCS
Por favor, use este identificador para citar o enlazar este ítem: https://hdl.handle.net/20.500.12104/104871
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dc.contributor.authorMatuz Flores, Mónica Guadalupe
dc.date.accessioned2024-09-18T17:31:42Z-
dc.date.available2024-09-18T17:31:42Z-
dc.date.issued2022-10-21
dc.identifier.urihttps://wdg.biblio.udg.mx
dc.identifier.urihttps://hdl.handle.net/20.500.12104/104871-
dc.description.abstractLa artritis reumatoide (AR) es una enfermedad autoinmune, inflamatoria, crónica y sistémica, que se caracteriza por la producción de citocinas y presencia de autoanticuerpos como factor reumatoide (FR) y anticuerpos contra proteínas citrulinadas (ACPA). Se ha demostrado que en conjunto los factores genéticos, hormonales y ambientales contribuyen hasta en un 60% al desarrollo de la AR. Los genes de susceptibilidad que incluyen alelos del HLA y no HLA como PADI4, PTPN22, STAT4, IRF5, CTLA4, FCRL3, aunque estos pueden variar de acuerdo con la población. Para PADI4 se han identificado polimorfismos de un solo nucleótido PADI4_89, PADI4_90 y PADI4_92 que generan sustituciones de aminoácidos, donde el haplotipo susceptible (GTG) de PADI4 se asocia con un incremento de expresión de mRNA y niveles de ACPA en diversas poblaciones como japonesa, coreana, norteamericana, occidente y sur de México, pero esta asociación no fue encontrada en poblaciones de origen caucásico como Reino unido, Francia e Inglaterra. El presente estudio fue diseñado para determinar la relación de los haplotipos del gen PADI4 con la expresión génica, actividad enzimática y variables clínicas en pacientes con AR del norte de México. Se realizó un estudio transversal-analítico en el que se incluyeron 200 pacientes con AR y 200 SC. La identificación de polimorfismos PADI4 se realizó por PCR-RFLP, la expresión de mRNA del gen PADI4 se determinó con qPCR en muestras clasificadas como homocigotas para los haplotipos ACC y GTG, el análisis de actividad enzimática por HPLC incluyó 8 SC y pacientes con AR y 8 portadores de los haplotipos GTG y ACC, los anticuerpos contra péptidos citrulinados cíclicos (anti-CCP) se cuantificaron mediante un ensayo inmunoabsorbente ligado a enzimas (ELISA). Para el análisis estadístico se utilizó el software STATA v 9.2 y GraphPad Prism v 8.0. y se consideró como significativo un valor de p
dc.description.tableofcontents1. ANTECEDENTES .................................................................................................................... 2 1.1 Artritis reumatoide................................................................................................................... 2 1.1.1 Daño estructural ............................................................................................................... 3 1.1.2 Criterios de clasificación................................................................................................ 5 1.1.3 Epidemiología.................................................................................................................... 6 1.1.4 Etiología.............................................................................................................................. 6 1.1.4.1 Factores genéticos ....................................................................................................... 7 1.1.4.2 Factores ambientales................................................................................................... 8 1.1.4.3 Factores hormonales ................................................................................................... 9 1.1.5 Patogénesis ..................................................................................................................... 10 1.1.6 Respuesta inmune en el desarrollo de AR .............................................................. 10 1.1.7 Gen de peptidil arginina desaminasa tipo IV .......................................................... 12 1.1.7.1 Polimorfismos del gen PADI4 y estudios de asociación.................................. 14 1.1.8 Enzima peptidil arginina desaminasa tipo 4 ........................................................... 16 1.1.8.1 Función de PAD4......................................................................................................... 18 2. PLANTEAMIENTO DEL PROBLEMA....................................................................................... 20 3. HIPÓTESIS..................................................................................................................................... 21 4. OBJETIVO GENERAL.................................................................................................................. 21 4.1 Objetivos particulares .......................................................................................................... 21 5. DISEÑO METODOLÓGICO......................................................................................................... 22 5.1 Tipo de estudio....................................................................................................................... 22 5.2 Sede del estudio..................................................................................................................... 22 5.3 Consideraciones éticas........................................................................................................ 22 5.4 Universo de estudio.............................................................................................................. 22 II 5.5 Periodo de estudio ................................................................................................................ 23 5.6 Criterios de inclusión ........................................................................................................... 23 5.7 Criterios de no inclusión ..................................................................................................... 23 5.8 Criterios de exclusión........................................................................................................... 23 5.9 Variables .................................................................................................................................. 23 5.10 Pruebas de laboratorio....................................................................................................... 24 5.11 Índices de actividad y discapacidad funcional............................................................ 24 5.12 Extracción de DNA genómico .......................................................................................... 25 5.13 Genotipificación PADI4_89 y PADI4_90 ........................................................................ 26 5.14 Genotipificación PADI4_92 ............................................................................................... 27 5.15 Extracción de RNA total y síntesis de cDNA................................................................ 28 5.16 PCR cuantitativa en tiempo real para la expresión de PADI4.................................. 29 5.17 Aislamiento de células mononucleares de sangre periférica (PBMCs) y polimorfonucleares (PMNs)....................................................................................................... 30 5.18 Evaluación del estándar Dns-Gly-Cit ............................................................................. 30 5.19 Actividad de PAD................................................................................................................. 31 5.20 Análisis mediante HPLC .................................................................................................... 31 5.21 Determinación de proteína................................................................................................ 32 5.22 Análisis de la actividad enzimática................................................................................. 32 5.24 Análisis estadístico............................................................................................................. 33 6. RESULTADOS ........................................................................................................................... 35 6.1 Características clínicas y demográficas de sujetos control y pacientes con AR 35 6.2 Comparación parámetros clínicos de sujetos control y pacientes con AR........... 36 6.3 Correlación de factores ambientales con niveles de anti-CCP................................. 37 6.4 Identificación del polimorfismo PADI4 89 G>A y 90 T>C............................................ 39 6.5 Identificación del polimorfismo PADI4 92 G>C ............................................................. 41 6.6 Frecuencias del polimorfismo PADI4 en pacientes con SC y AR............................. 42 6.7 Análisis de desequilibrio de ligamiento de SNPs de PADI4....................................... 46 6.8 Asociación de los polimorfismos de PADI4 con actividad clínica de la enfermedad .................................................................................................................................... 47 6.9 Asociación de los polimorfismos de PADI4 con las variables clínicas en AR...... 48 6.10 Asociación de los polimorfismos de PADI4 con niveles de autoanticuerpos .... 49 6.11 Expresión génica de PADI4 en sujetos control y pacientes con AR..................... 51 6.12 Evaluación de Dns-Gly-Arg y muestras estándar....................................................... 53 6.13 Evaluación de actividad de PAD4 en SC y pacientes con AR.............................. 54 7. DISCUSIÓN................................................................................................................................. 58 III 8. CONCLUSIONES....................................................................................................................... 63 9. PERSPECTIVAS........................................................................................................................ 65 10. LIMITACIONES ...................................................................................................................... 65 11. PRODUCTOS OBTENIDOS................................................................................................. 66 12. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS................................................................................... 75 13. ANEXOS.................................................................................................................................. 82 10.1 Metodología de cuantificación de Anti-CCP ................................................................ 82 10.2 Metodología de cuantificación de proteína C reactiva .............................................. 82 10.3 Metodología de cuantificación de velocidad de sedimentación globular............ 83 10.4 Metodología de cuantificación de factor reumatoide ................................................ 83
dc.formatapplication/PDF
dc.language.isospa
dc.publisherBiblioteca Digital wdg.biblio
dc.publisherUniversidad de Guadalajara
dc.rights.urihttps://www.riudg.udg.mx/info/politicas.jsp
dc.subjectHaplotipos
dc.subjectGen Padi4
dc.subjectArtritis Reumatoide
dc.subjectMexico
dc.titleRelación de los haplotipos del gen PADI4 (GTG/ACC) con la expresión génica, actividad enzimática y variables clínicas en pacientes con artritis reumatoide del norte de México
dc.typeTesis de Doctorado
dc.rights.holderUniversidad de Guadalajara
dc.rights.holderMatuz Flores, Mónica Guadalupe
dc.coverageGUADALAJARA, JALISCO
dc.type.conacytdoctoralThesis
dc.degree.nameDOCTORADO EN CIENCIAS BIOMEDICAS
dc.degree.departmentCUCS
dc.degree.grantorUniversidad de Guadalajara
dc.rights.accessopenAccess
dc.degree.creatorDOCTOR EN CIENCIAS BIOMEDICAS
dc.contributor.directorMuñoz Valle, José Francisco
dc.contributor.codirectorRosas Rodríguez, Jesús Alfredo
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