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https://hdl.handle.net/20.500.12104/98098
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Campo DC | Valor | Lengua/Idioma |
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dc.contributor.advisor | Columba Palomares, María Crystal | |
dc.contributor.author | Teta Talixtacta, Rubicela | |
dc.date.accessioned | 2024-03-11T18:29:58Z | - |
dc.date.available | 2024-03-11T18:29:58Z | - |
dc.date.issued | 2024-01-15 | |
dc.identifier.uri | https://wdg.biblio.udg.mx | |
dc.identifier.uri | https://hdl.handle.net/20.500.12104/98098 | - |
dc.description.abstract | La especie Acmella radicans (Jacq.) R.K. Jansen, conocida comúnmente como hierba de la muela, es una planta a la cual se le atribuyen propiedades medicinales. Al respecto, son escasos los estudios científicos que se han realizado con fines de poder validar esas atribuciones biológicas. En el presente estudio se realizó un análisis químico de la planta silvestre y de las raíces elicitadas cultivadas en condiciones in vitro. También se evaluó el potencial antioxidante, antiinflamatoria, y antibacteriana de sus extractos, así como de las fracciones obtenidas de la planta. Durante la cinética de crecimiento de las raíces cultivadas, la mejor apariencia de las raíces se mostró durante los días 15 y 20, mostrando también el mayor contenido de FET y FVT en el día 20 con valores de 13.19 mg EAG/g de BS y 1.70 mg EQ/g de BS, respectivamente. El mismo comportamiento se observó en la actividad antioxidante (ABTS o DPPH), la cual se tuvo una relación con el contenido de FET y FVT. En cuanto a la elicitación de los cultivos, se mostró que la adición de AS o AJ no afectó significativamente la producción de biomasa seca de raíces cultivadas, las cuales rondaron entre 4.24 a 4.78 g/L; sin embargo, con AJ sí hubo un incremento significante en el contenido de FET (18.67‒21.78 mg EAG/g BS) y FVT (2.96– 3.37 mg EQ/g BS) con respecto al control. La actividad antioxidante también se vio afectada principalmente por el AJ. Para ABTS se nota más del doble de actividad (6.96– 8.50 mM ET/g BS) en todas las concentraciones evaluadas, mientras que por DPPH (16.75‒19.55 mM ET/g BS) la actividad fue casi el doble con respecto al control. Este es el primer estudió que determina la actividad antiinflamatoria in vitro de A. radicans, encontrando que las fracciones de diclorometano de ambos extractos etanólicos (de la raíz y la parte aérea de la planta silvestre) presentaron la mayor inhibición en la producción de óxido nítrico (ON). A 25 μg/mL las fracciones FD-EEPA y FD-EER redujeron significativamente la producción de ON hasta 22.2 ± 1.9 y 22.2 ± 2.9 μM, respectivamente, en comparación con la concentración encontrada en las células tratadas únicamente con el estímulo LPS (43.5 ± 3.5 μM). Además, estas fracciones fueron las más activas inhibiendo la producción de TNF-α, a 25 μg/mL redujeron su concentración a 22.6 ± 3.3 pg/mL (FD-EEPA) y 24.8 ± 5.3 pg/mL (FD-EER), en comparación con las células tratadas solo con LPS (45.2 ± 14.8 pg/mL). Sin embargo, los extractos etanólicos de las raíces cultivadas en matraces agitados presentaron un efecto marginal en la reducción del ON y ningún efecto sobre la inhibición de TNF-α. Por otra parte, el análisis del perfil químico por CG-EM destaca la presencia de las alcamidas N-isobutil-2E,6Z,8E-decatrienamida (3), N-(2-metilbutil)-2E,6Z,8Edecatrienamida (6), N-(2-feniletil)-2E,4Z-octadienamida (12) y 3-fenil-N-(2-feniletil)-2-propenamida (14) en los extractos de la planta silvestre, sin embargo, no se detectaron alcamidas en los extractos de las raíces cultivadas en matraces agitados. En cuanto a las fracciones, las alcamidas se encontraron en mayor abundancia en las fracciones de diclorometano en comparación con las fracciones de hexano correspondientes. Por lo tanto, las alcamidas podrían ser responsables parcialmente de la actividad antiinflamatoria. | |
dc.description.tableofcontents | AGRADECIMIENTOS .......................................................................................................................... i DEDICATORIA ..................................................................................................................................... ii ÍNDICE GENERAL .............................................................................................................................. iii ÍNDICE DE FIGURAS ......................................................................................................................... vi ÍNDICE DE TABLAS ............................................................................................................................ x Resumen ..................................................................................................................................................1 Abstract ....................................................................................................................................................3 1. Introducción ....................................................................................................................................5 2. Antecedentes .......................................................................................................................................7 2.1. Las plantas medicinales y su uso de la medicina tradicional ...............................................7 2.1.1. Importancia de la familia Asteraceae ....................................................................................7 2.2 Radicales libres y antioxidantes .................................................................................................8 2.3. Inflamación ................................................................................................................................10 2.3.1. Modalidades de la inflamación ............................................................................................11 2.3.2 Mediadores de la inflamación ...............................................................................................12 2.4. Actividad antibacteriana ..........................................................................................................13 2.4.1. Resistencia antibióticos ......................................................................................................13 2.5. Descripción botánica de Acmella radicans ...............................................................................13 2.6. Importancia de A. radicans en la medicina tradicional .........................................................15 2.7. Estudios biológicos del género Acmella ..................................................................................15 2.8. Estudios fitoquímicos del género Acmella ..............................................................................16 2.9. Importancia de A. radicans en la medicina tradicional .........................................................17 2.10. Estudios biotecnológicos de A. radicans ...............................................................................17 3. Justificación .......................................................................................................................................19 4. Hipótesis ............................................................................................................................................20 5. Objetivos ............................................................................................................................................20 5.1. Objetivo general ........................................................................................................................20 5.2. Objetivos específicos .................................................................................................................20 6. Materiales y Métodos ......................................................................................................................21 6.1. Colecta del material vegetal .....................................................................................................21 6.2. Establecimiento de cultivos in vitro. .......................................................................................22 6.2.1. Medio de cultivo y germinación de semillas ..................................................................22 6.2.2. Inducción de raíces adventicias en medio de cultivo gelificado .................................23 6.2.3. Cultivos de raíces en matraces agitados y cinética de crecimiento .............................24 6.2.4. Elicitación de cultivos de raíces en matraces agitados ..................................................25 6.3. Obtención de extractos para determinar polifenoles totales y actividad antioxidante ...25 6.3.1. Determinación del contenido de fenoles (FET) y flavonoides totales (FVT) .............27 6.3.2. Actividad antioxidante por DPPH y ABTS .....................................................................28 6.4. Obtención de los extractos y fracciones de la planta silvestre y perfil químico por CGEM ......................................................................................................................................................29 6.4.1 Extractos etanólicos .............................................................................................................29 6.4.2 Fraccionamiento de los extractos ......................................................................................31 6.5 Análisis de las fracciones por cromatografía en capa fina ....................................................32 6.6. Fraccionamiento por cromatografía en columna ..................................................................33 6.7. Análisis de los extractos y fracciones por CG-EM ................................................................35 6.8. Actividad biológica de los extractos y fracciones .................................................................36 6.8.1. Actividad antiinflamatoria in vitro .......................................................................................36 6.8.1.1. Cultivo celular RAW 264.7 .............................................................................................36 6.8.1.2. Pretratamiento de los macrófagos RAW 264.7 y estimulación con LPS ..................36 6.8.1.3. Ensayo de viabilidad celular ..........................................................................................37 6.8.1.4. Determinación de la concentración de ON ..................................................................37 6.8.1.5. Cuantificación de la citocina TNF-α mediante ensayos de ELISA ...........................37 6.8.2. Actividad antibacteriana .......................................................................................................38 6.8.2.1. Microorganismos .............................................................................................................38 6.8.2.2. Método de dilución en caldo .........................................................................................39 6.9. Análisis del perfil químico por CG-EM de la parte aérea y raíces de la planta silvestre 40 6.10. Análisis estadístico ..................................................................................................................40 7. Resultados y Discusión....................................................................................................................42 7.1. Germinación de semillas e inducción de raíces adventicias ...............................................42 7.2. Cultivo de raíces en matraces agitados y cinética de crecimiento .....................................42 7.2.1. Contenido de polifenoles totales y actividad antioxidante en la cinética de crecimiento y planta silvestre. ....................................................................................................46 7.3. Efecto del ácido salicílico (AS) y ácido jasmónico (AJ) en el cultivo de raíces .................52 7.3.1. Efecto en el peso seco .........................................................................................................52 7.3.2. Efecto en el contenido de FET y FVT. ..............................................................................56 7.3.3. Efecto en la actividad antioxidante por ABTS y DPPH. ...............................................59 7.4. Extractos de la planta silvestre y su fraccionamiento ..........................................................61 7.5. Actividad biológica de extractos y fracciones .......................................................................62 7.5.1. Determinación de la viabilidad celular en células RAW 264.7 ....................................62 7.5.2. Determinación de la inhibición de la producción de óxido nítrico .............................66 7.5.3. Determinación de la inhibición de la expresión de TNF-α ..........................................72 7.5.4. Actividad antibacteriana ...................................................................................................78 7.6. Análisis fitoquímico ..................................................................................................................80 7.6.1. Perfil químico de los extractos etanólicos por CG-EM ..................................................80 7.6.2. Perfil químico de las fracciones de los extractos etanólicos de la planta silvestre por CG-EM ...........................................................................................................................................85 7.6.3. Fraccionamiento por cromatografía en columna de la fracción FD-EEPA ................87 8. Conclusiones .....................................................................................................................................88 9. Perspectivas .......................................................................................................................................89 10. Referencias ......................................................................................................................................90 | |
dc.format | application/PDF | |
dc.language.iso | spa | |
dc.publisher | Biblioteca Digital wdg.biblio | |
dc.publisher | Universidad de Guadalajara | |
dc.rights.uri | https://www.riudg.udg.mx/info/politicas.jsp | |
dc.title | Perfil fitoquímico y actividad antiinflamatoria, antioxidante y antibacteriana de raíces cultivadas in vitro y planta silvestre de Acmella radicans | |
dc.type | Tesis de Maestría | |
dc.rights.holder | Universidad de Guadalajara | |
dc.rights.holder | Teta Talixtacta, Rubicela | |
dc.coverage | GUADALAJARA, JALISCO | |
dc.type.conacyt | masterThesis | |
dc.degree.name | MAESTRIA EN CIENCIA DE PRODUCTOS FORESTALES | |
dc.degree.department | CUCEI | |
dc.degree.grantor | Universidad de Guadalajara | |
dc.rights.access | openAccess | |
dc.degree.creator | MAESTRO EN CIENCIA DE PRODUCTOS FORESTALES | |
dc.contributor.director | Bernabé Antonio, Antonio | |
dc.contributor.codirector | Hurtado Díaz, Israel | |
Aparece en las colecciones: | CUCEI |
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