Por favor, use este identificador para citar o enlazar este ítem: https://hdl.handle.net/20.500.12104/96323
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dc.contributor.advisorVargas Radillo, J. De Jesus
dc.contributor.advisorVargas Guerrero, Belinda
dc.contributor.advisorGurrola Diaz, Carmen Magdalena
dc.contributor.authorPizano Andrade, Juan Carlos
dc.date.accessioned2023-11-10T19:51:21Z-
dc.date.available2023-11-10T19:51:21Z-
dc.date.issued2023-03-17
dc.identifier.urihttps://wdg.biblio.udg.mx
dc.identifier.urihttps://hdl.handle.net/20.500.12104/96323-
dc.description.abstractRESUMEN Las plantas y el sol han jugado un papel importante en las actividades humanas diarias. El sol proporciona calor y energía, y las plantas han servido como fuente de alimento, vestimenta y materiales de vivienda además proporcionan una gran fuente de principios activos que han servido como una farmacopea natural. Continuamente estamos expuestos al sol, sin embargo, el daño ocasionado por la exposición a estado en aumento los últimos años. Uno de los daños más severos por la exposición a la luz UV es la generación de tumores. Unos de los genes implicados son el p53 y RB, los cuales pueden modificar su expresión e incluso mutar cuando durante exposiciones prolongadas al sol. Para la caracterización de los extractos de compuestos fenólicos se inyectaron 20 μL de cada extracto después de filtrarse con filtros millipore de 0.45 μm de diámetro, en un sistema HPLC (Agilent Technologies 1260 Infinity, Waldbronn, Alemania) equipado con un detector de arreglo de fotodiodos y un Columna de fase inversa C18 (tamaño de partícula de 5 μm, 4,6 mm de diámetro, 250 mm de largo; Thermo Scientific, Sunnyvale, CA, EE. UU.), pudiendo identificar hasta 15 compuestos diferentes en extracto de hoja y 14 en extracto de pulpa.Las acetogeninas y polifenoles han mostrado tener enormes beneficios en el modelo murino usado para estudiar la expresión de los genes de interés, pues se presentó una disminución de la expresión génica en los grupos tratados, además se observó disminución del grosor de la epidermis en los grupos tratados con los extractos, así como una disminución en el conteo de fibroblastos por mm2. Los resultados obtenidos sugieren que existe un fuerte efecto protector de los extractos de Annona muricata frente al daño ocasionado por la luz UV.
dc.description.tableofcontentsTabla de contenidos 1. INTRODUCCIÓN .......................................................................................................... 1 2. HIPÓTESIS ....................................................................................................... 2 2.1 OBJETIVO GENERAL .............................................................................................................. 2 2.2 OBJETIVOS PARTICULARES .................................................................................................... 2 3. MARCO TEÓRICO ........................................................................................... 3 3.1 LUZ SOLAR ........................................................................................................................... 3 3.2 ESTRUCTURA Y FUNCIÓN DE LA PIEL ...................................................................................... 4 3.3 EFECTO DE LA RADIACIÓN ULTRAVIOLETA EN LA PIEL ............................................................... 6 3.4 SISTEMAS DE PROTECCIÓN DE LA PIEL ................................................................................... 7 3.4.1 MECANISMOS PREVENTIVOS EXÓGENOS ............................................................................ 7 3.4.2 MECANISMOS PREVENTIVOS ENDÓGENOS ......................................................................... 7 3.5 MECANISMOS REPARADORES E INDUCCIÓN DE TUMORES EN PIEL ........................................... 10 3.6 GEN P53 Y RB EN LOS PROCESOS TUMORALES .................................................................... 11 3.7 EXPRESIÓN GÉNICA Y SU CUANTIFICACIÓN ........................................................................... 12 3.8 EXTRACCIÓN DE COMPUESTOS VEGETALES .......................................................................... 13 3.9 ANNONA MURICATA ............................................................................................................. 15 3.10 ACETOGENINAS Y VÍA DE SÍNTESIS ....................................................................................... 16 3.11 PROPIEDADES BIOLÓGICAS .................................................................................................. 18 3.12 COMPUESTOS FENÓLICOS ................................................................................................... 18 3.13 VÍA DE SÍNTESIS DE COMPUESTOS FENÓLICOS ...................................................................... 18 3.14 PROPIEDADES FARMACOLÓGICAS ........................................................................................ 20 4. MATERIALES Y MÉTODOS ........................................................................... 22 4.1 FASE FITOQUÍMICA .............................................................................................................. 22 4.1.1 COLECTA Y SECADO DEL MATERIAL ................................................................................. 22 4.1.2 ANÁLISIS CUALITATIVO ................................................................................................... 23 4.1.3 EXTRACCIÓN Y DETERMINACIÓN DE ACETOGENINAS ......................................................... 25 4.2 CROMATOGRAFÍA EN CAPA FINA DE ALTA RESOLUCIÓN (HPTLC) ........................................... 25 4.3 ANÁLISIS CUANTITATIVOS .................................................................................................... 26 4.3.1 EXTRACCIÓN DE COMPUESTOS FENÓLICOS ...................................................................... 26 4.3.2 ELIMINACIÓN DE CLOROFILAS EN EXTRACTOS FENÓLICOS ................................................. 26 4.3.3 EVALUACIÓN DEL FACTOR DE PROTECCIÓN SOLAR ........................................................... 26 4.3.4 CUANTIFICACIÓN DE COMPUESTOS FENÓLICOS POR EL MÉTODO DE FOLIN-CIOCALTEU ...... 27 4.3.5 CUANTIFICACIÓN DE FLAVONOIDES ................................................................................. 27 4.3.6 DETERMINACIÓN DE LA CAPACIDAD ANTIOXIDANTE MEDIANTE DPPH ................................. 27 4.3.7 DETERMINACIÓN DE LA CAPACIDAD ANTIOXIDANTE MEDIANTE FRAP ................................. 28 ii 4.3.8 CUANTIFICACIÓN E IDENTIFICACIÓN DE COMPUESTOS FENÓLICOS MEDIANTE HPLC ........... 28 4.4 FASE DE EXPRESIÓN GÉNICA ............................................................................................... 29 4.4.1 MODELO MURINO, INDUCCIÓN DEL MODELO EXPERIMENTAL DE DAÑO POR LUZ UV ............. 29 4.4.2 EXTRACCIÓN DE RNA A PARTIR DE LA PIEL DE RATA ........................................................ 30 4.4.3 DETERMINACIÓN DE LA CONCENTRACIÓN Y PUREZA DEL RNA. ......................................... 31 4.4.4 RETRO TRANSCRIPCIÓN ................................................................................................. 31 4.4.5 DISEÑO Y ANÁLISIS DE LOS PRIMERS ............................................................................... 32 4.4.6 CUANTIFICACIÓN DE LA EXPRESIÓN GÉNICA DE LOS GENES P53 YRB, POR MEDIO DE PCR EN TIEMPO REAL .................................................................................................................................. 32 4.5 FASE DE ANÁLISIS HISTOLÓGICO DE LA PIEL DE RATA ............................................................. 34 4.6 ANÁLISIS ESTADÍSTICO ........................................................................................................ 34 5. RESULTADOS ................................................................................................ 35 5.1 FASE FITOQUÍMICA .............................................................................................................. 35 5.1.1 TAMIZAJE FITOQUÍMICO A EXTRACTOS ETANÓLICOS Y METANÓLICOS DE HOJA Y PULPA. ...... 35 5.1.2 CROMATOGRAFÍA EN CAPA FINA ...................................................................................... 37 5.1.3 FACTOR DE PROTECCIÓN SOLAR (FPS) ........................................................................... 38 5.1.5 CONTENIDO DE FENOLES Y FLAVONOIDES TOTALES .......................................................... 40 5.1.6 CARACTERIZACIÓN DE COMPUESTOS FENÓLICOS DE HOJA Y PULPA MEDIANTE HPLC ......... 41 5.2 FASE DE EXPRESIÓN GÉNICA ............................................................................................... 43 5.2.1 DETERMINACIÓN DE LA CONCENTRACIÓN Y PUREZA DEL RNA .......................................... 43 5.2.2 DISEÑO Y ANÁLISIS DE PRIMERS ...................................................................................... 44 5.2.3 CUANTIFICACIÓN DE LA EXPRESIÓN GÉNICA DE RB Y P53 DE LOS GRUPOS DE ESTUDIO ...... 48 5.3 FASE HISTOLÓGICA ............................................................................................................. 51 5.3.1 ANÁLISIS HISTOLÓGICOS ................................................................................................ 51 6. DISCUSIÓN .................................................................................................... 55 6.1 FASE FITOQUÍMICA .............................................................................................................. 55 6.2 FASE DE EXPRESIÓN GÉNICA ............................................................................................... 58 6.3 FASE HISTOLÓGICA ............................................................................................................. 59 7. CONCLUSIONES Y RECOMENDACIONES .................................................. 62 8. LITERATURA CITADA ................................................................................... 63 9. ANEXOS ....................................................................................................................... 70 CURVA DE CALIBRACIÓN CON ÁCIDO GÁLICO ..................................................................................... 70 CURVA DE CALIBRACIÓN CON QUERCETINA ....................................................................................... 72 ARTÍCULO PUBLICADO ..................................................................................................................... 73
dc.formatapplication/PDF
dc.language.isospa
dc.publisherBiblioteca Digital wdg.biblio
dc.publisherUniversidad de Guadalajara
dc.rights.urihttps://www.riudg.udg.mx/info/politicas.jsp
dc.subjectExpresion
dc.subjectGenica
dc.subjectP53
dc.subjectRb
dc.subjectMurino
dc.subjectRadiacion
dc.subjectUv
dc.subjectAcetogeninas
dc.subjectPolifenoles
dc.subjectAnnona
dc.subjectMuricata
dc.subjectL.
dc.titleExpresión génica de P53 y RB en un modelo murino expuesto a radiación UV tratado con acetogeninas y polifenoles de Annona muricata L.
dc.typeTesis de Doctorado
dc.rights.holderUniversidad de Guadalajara
dc.rights.holderPizano Andrade, Juan Carlos
dc.coverageZAPOPAN JALISCO
dc.type.conacytdoctoralThesis
dc.degree.nameDOCTORADO EN CIENCIAS EN BIOSISTEMATICA, ECOLOGIA Y MANEJO DE RECURSOS NATURALES Y AGRICOLAS DT
dc.degree.departmentCUCBA
dc.degree.grantorUniversidad de Guadalajara
dc.rights.accessopenAccess
dc.degree.creatorDOCTOR EN CIENCIAS EN BIOSISTEMATICA, ECOLOGIA Y MANEJO DE RECURSOS NATURALES Y AGRICOLAS DT
dc.contributor.directorRuiz Lopez, Mario Alberto
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