1. RIUdeG
  2. Tesis
  3. Licenciatura
  4. CUCIENEGA
Por favor, use este identificador para citar o enlazar este ítem: https://hdl.handle.net/20.500.12104/91968
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Campo DCValorLengua/Idioma
dc.contributor.advisorRodríguez Sahagún, Araceli
dc.contributor.advisorCastellanos Hernández, Osvaldo Adrián
dc.contributor.authorReynoso Cárdenas, Carlos Adolfo
dc.date.accessioned2023-04-18T22:08:11Z-
dc.date.available2023-04-18T22:08:11Z-
dc.date.issued2019-12-10
dc.identifier.urihttps://wdg.biblio.udg.mx
dc.identifier.urihttps://hdl.handle.net/20.500.12104/91968-
dc.description.abstractLa identificación de bacterias capaces de estimular el crecimiento vegetal nos permite estudiar a fondo como es que se genera y lleva a cabo este proceso entre plantas y bacterias. Ciertas especies de bacterias que se han aislado de las raíces de plantas leguminosas han demostrado ser organismos altamente eficientes para promover el crecimiento vegetal por medio de un proceso simbiótico de nodulación y fijación de nitrógeno atmosférico, tal es el caso del género Rhizobium. Los microrganismos capaces de estimular el crecimiento vegetal ya sea de forma directa o indirecta son una alternativa para el remplazo de los fertilizantes químicos, que son un tema importante en la toxicidad ambiental. Además, debido al continuo crecimiento de la población, se ha estimado que para el 2030 la demanda de alimentos aumentará en un 50%, expectativa que no se podrá cumplir de forma sustentable a menos que se restaure la fertilidad perdida de las tierras de cultivo. La reversión de la disminución en la fertilidad del suelo es una posibilidad mediante el empleo de bacterias promotoras del crecimiento vegetal (PGP). En esta investigación se identificaron filogenéticamente cinco de las seis cepas de bacterias aisladas de la raíz del árbol leguminoso Enterolobium cyclocarpum empleando la secuencia del gen 16S ARNr, correspondiendo las cepas R2, R3, R4 y R5 a la especie Agrobacterium tumefaciens, y la cepa R6 a Rhodococcus erytropolis, mientras que la identificación de la cepa R1 fue descartada debido a la baja calidad de su ADN extraído; también se evaluó la presencia de genes involucrados en la nodulación (nodC) y fijación de nitrógeno (nifH), en donde todas las cepas estudio mostraron la ausencia del gen nodC y una amplificación inespecífica del gen nifH que atribuimos a los cebadores; con respecto al material extracromosómico, todas las cepas mostraron la presencia de plásmidos. Además, fue evaluada su capacidad promotora del crecimiento vegetal mediante ensayos in vivo en plántulas de E. cyclocarpum, donde solo algunas cepas mostraron actividad PGP incrementando la biomasa radicular y el contenido de clorofila A foliar, mientras que de una cepa se observó un comportamiento patogénico y ninguna cepa fue capaz de nodular con la especie de árbol empleada; del conjunto de ensayos in vitro XIV realizados, todas las cepas mostraron ser microorganismos capaces de fijar nitrógeno atmosférico, además de producir y secretar fitohormonas (auxinas).
dc.description.tableofcontentsÍNDICE DE CONTENIDO DICTAMEN DE ACEPTACIÓN.................................................................................................. I DECLARATORIA............................................................................................................... II DEDICATORIAS............................................................................................................... III AGRADECIMIENTOS..........................................................................................................IV ÍNDICE DE CONTENIDO.....................................................................................................VI ÍNDICE DE FIGURAS ........................................................................................................IX ÍNDICE DE TABLAS...........................................................................................................X ABREVIATURAS..............................................................................................................XI UNIDADES DE MEDICIÓN...................................................................................................XI RESUMEN ..................................................................................................................XIII ABSTRACT.................................................................................................................. XV 1. INTRODUCCIÓN ......................................................................................................... 1 1.1 Sustentabilidad Agrícola ............................................................................................ 1 1.2 Rizobacterias Promotoras del Crecimiento Vegetal (PGPR).................................................... 2 1.2.1 Estimulación directa............................................................................................... 3 1.2.2 Estimulación indirecta............................................................................................ 5 1.3 Clasificación de rizobacterias...................................................................................... 6 1.4 Simbiosis entre iPGPR y leguminosas ............................................................................ 6 1.5 Proceso simbiótico de nodulación y fijación de nitrógeno.................................................... 7 1.6 Los genes nod y su producto: el factor Nod .................................................................... 9 1.7 Los genes nif y su producto: la nitrogenasa.................................................................... 10 1.8 El árbol Enterolobium cyclocarpum............................................................................. 11 2. PLANTEAMIENTO DEL PROBLEMA.................................................................................. 13 3. JUSTIFICACIÓN....................................................................................................... 14 4. HIPÓTESIS ............................................................................................................ 14 5. OBJETIVOS............................................................................................................ 14 5.1 Objetivo general................................................................................................... 14 5.2 Objetivos particulares ............................................................................................ 14 5.2.1 Objetivo particular 1 ............................................................................ ...............14 5.2.2 Objetivo particular 2 ........................................................................................... 15 5.2.3 Objetivo particular 3 ........................................................................................... 15 6. MATERIALES Y MÉTODOS............................................................................................ 15 VII 6.1 Material biológico.................................................................................................. 15 6.2 Caracterización molecular de las cepas R1 a R6 ............................................................. 15 6.2.1 Preparación del material genético........................................................................... 15 6.2.2 Amplificación por PCR de la región 16S ARN ribosomal y purificación de los productos................................................................................................................ 16 6.2.3 Secuenciación y definición de la especie empleando bases de datos ........................................................................................................................... 16 6.2.4 Amplificación de los genes nodC y nifH..................................................................... 17 6.2.5 Verificación de la presencia de plásmidos.................................................................. 17 6.3 Caracterización funcional ....................................................................................... 18 6.3.1 Germinación de las semillas de E. cyclocarpum ........................................................... 19 6.3.2 Riego e inoculación............................................................................................. 19 6.3.3 Determinación del crecimiento vegetal .................................................................... 19 6.3.4 Determinación del contenido de clorofila A (ChlA) ....................................................... 20 6.3.5 Determinación de proteína total en hojas.................................................................. 20 6.3.6 Ensayo in vitro para determinar la estimulación del crecimiento vegetal por fitohormonas (auxinas) ................................................................................ 21 6.3.7 Determinación de la capacidad productora de AIA ....................................................... 22 6.3.8 Determinación de la capacidad fijadora de nitrógeno en medio Jensen................................................................................................................... 22 6.3.9 Determinación de la capacidad solubilizadora de fosfato en medio agar Pikovskaya........................................................................................................ 23 6.3.10 Determinación de la capacidad productora de amonio................................................. 23 6.3.11 Determinación de la actividad antagónica frente a hongos fitopatógenos ......................................................................................................... 24 7. RESULTADOS Y DISCUSIONES...................................................................................... 24 7.1 Caracterización molecular....................................................................................... 24 7.1.1 Preparación del material genético........................................................................... 24 7.1.2 Amplificación del gen 16S ARN ribosomal................................................................... 25 7.1.4 Comparación de las secuencias nucleotídicas en bases de datos empleando el algoritmo BLAST y construcción de un árbol filogenético27 7.1.5 Amplificación de los genes nodC y nifH..................................................................... 29 7.1.6 Verificación de la presencia de plásmidos.................................................................. 31 7.2 Caracterización funcional ...................................................................................... 32 VIII 7.2.1 Germinación de las semillas de E. cyclocarpum .......................................................... 32 7.2.2 Determinación del crecimiento vegetal ................................................................... 33 7.2.3 Determinación del contenido de clorofila A (ChlA) ...................................................... 38 7.2.4 Determinación de proteína total en hojas................................................................. 39 7.2.5 Ensayo in vitro para determinar el estímulo del crecimiento vegetal por fitohormonas (auxinas) ......................................................................................... 40 7.2.6 Determinación de la capacidad productora de AIA ...................................................... 43 7.2.7 Determinación de la capacidad fijadora de nitrógeno en medio Jensen .................................................................................................................. 45 7.2.8 Determinación de la capacidad solubilizadora de fosfatos en medio Pikovskaya ............................................................................................................ 46 7.2.9 Determinación de la capacidad productora de amonio................................................. 47 7.2.10 Determinación de la actividad antagónica frente a fitopatógenos 47 8. CONCLUSIONES ................................................................................................... 49 9. PERSPECTIVAS..................................................................................................... 50 10. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS................................................................................ 51 11. ANEXOS .......................................................................................................... 59
dc.formatapplication/PDF
dc.language.isospa
dc.publisherBiblioteca Digital wdg.biblio
dc.publisherUniversidad de Guadalajara
dc.rights.urihttps://www.riudg.udg.mx/info/politicas.jsp
dc.subjectEnterolobium Cyclocarpum
dc.title“Caracterización molecular y funcional de bacterias aisladas de la rizosfera del árbol Enterolobium cyclocarpum”
dc.typeTesis de Licenciatura
dc.rights.holderUniversidad de Guadalajara
dc.rights.holderReynoso Cárdenas, Carlos Adolfo
dc.coverageOCOTLAN, JALISCO
dc.type.conacytbachelorThesis
dc.degree.nameLICENCIATURA QUIMICO FARMACEUTICO BIOLOGO
dc.degree.departmentCUCIENEGA
dc.degree.grantorUniversidad de Guadalajara
dc.rights.accessopenAccess
dc.degree.creatorLICENCIADO EN QUIMICO FARMACEUTICO BIOLOGO
dc.contributor.directorAcevedo Hernández, Gustavo Javier
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