“CARACTERIZACIÓN FUNCIONAL DE UN GEN DE TERPENO SINTASA INVOLUCRADO EN LA SÍNTESIS DE METABOLITOS SECUNDARIOS EN Lippia graveolens (ORÉGANO MEXICANO)”

Abstract

Lippia graveolens (Orégano mexicano) es una planta aromática, sus hojas son un condimento ideal para gran número de platillos. El orégano mexicano se ha empleado en la medicina tradicional por varias culturas para aliviar una gran cantidad de problemas (digestivos, pulmonales, renales, nerviosos e infecciosos), además sus aceites esenciales se utilizan actualmente en la industria de jabones, perfumes y cosméticos principalmente. La mayoría de sus propiedades se deben a la alta composición de terpenos en su aceite esencial. Los terpenos son los compuestos más abundantes y diversos en la naturaleza, en las plantas cumplen diversos roles como atrayentes de polinizadores y defensa contra estrés biótico y abiótico. Los terpenos son sintetizados por una familia de enzimas llamadas terpeno sintasas, estas enzimas han sido ampliamente estudiadas en muchas especies vegetales por el gran número de enzimas por planta y la gran diversidad de compuestos que generan. Debido a la falta de información sobre la síntesis de terpenos en L. graveolens, el propósito de este estudio fue la obtención de un gen terpeno sintasa y su análisis, por lo que se procedió a la búsqueda de genes terpeno sintasa en el transcriptoma de L. graveolens, también se buscó la amplificación por PCR de fragmentos de ADNc empleando primers degenerados diseñados de regiones conservadas. A partir de las secuencias parciales TPS obtenidas en el transcriptoma de hoja y amplificados por PCR, se diseñaron primers para la obtención de un gen completo TPS, el gen obtenido fue clonado, su secuencia y la predicción de su estructura terciaria mostraron amplia similitud con genes terpeno sintasa, se encontraron los motivos funcionales caracteristicos de las enzimas terpeno sintasa (RRx8W y DDxxD), un análisis filogenético permitió clasificarla como parte de la familia TPSb (monoterpeno/isopreno sintasa) en el árbol elaborado por Chen et al., (2011) y el análisis de expresión de dos fragmentos de genes parciales TPS (5V y 7V) por PCR tiempo real mostró su mayor expresión en hoja y en tallo en comparación con la raíz.