Por favor, use este identificador para citar o enlazar este ítem: https://hdl.handle.net/20.500.12104/91957
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dc.contributor.authorAvalos Navarro, Guadalupe
dc.date.accessioned2023-04-18T21:58:58Z-
dc.date.available2023-04-18T21:58:58Z-
dc.date.issued2016-04-26
dc.identifier.urihttps://wdg.biblio.udg.mx
dc.identifier.urihttps://hdl.handle.net/20.500.12104/91957-
dc.description.abstractLa mayoría de las investigaciones se han enfocado en el estudio del efecto biológico de los extractos crudos de o a las antraquinonas aisladas de Aloe vera. Sin embargo, pocos estudios se enfocan en el análisis de productos comerciales semi- o terminados elaborados de esta planta. Por lo cual, este trabajo se enfocó en la evaluación de la inocuidad de productos comerciales semi-terminados utilizados como suplementos alimenticios. Para ello se realizó una evaluación de la concentración de antronas y antraquinonas (aloína, aloeemodina y emodina), mediante CLAR así como el efecto antimicrobiano y citotóxico, con el fin de confirmar científicamente las propiedades biológicas de las muestras comerciales después de ser sometidas a procesos físicos, químicos y térmicos. Los principales resultados fueron; A) la secuencias obtenida presentó una similitud e identidad del 100% con A. vera (No. de acceso KC893746.1) y un 98% de cobertura. Por lo tanto todos los efectos analizados y detectados en este trabajo se atribuyeron a la planta Aloe vera; B) las antronas y antraquinonas detectadas en extractos crudos y muestras comerciales fueron aloína, aloe-emodina y emodina. En los extractos crudos (gel, corteza y gel-corteza); las concentraciones de los tres metabolitos fue mayor en la corteza: aloína con 1459 ± 0,01 µg/mL; aloe-emodina con 990 ± 0,30 µg/mL; y emodina con 8 ± 0,02 µg/mL. En las muestras comerciales aloína fue detectada en todas las muestras en un rango de 0,75- 1,37 µg/mL; aloe-emodina fue detectada en dos muestras (WLPD e ILP) con 0,67 y 0,37 respectivamente. C) los extractos crudos metanólicos y muestras comerciales no presentaron inhibición sobre ninguna de las bacterias utilizadas (bacterias Gram positivas y negativas); sin embargo, al evaluar los estándares comerciales emodina ocasionó una inhibición sobre Staphylococcus aureus a una concentración de 12,5 µg/mL, siendo el primer informe de actividad antimicrobiana. Finalmente, los efectos citotóxicos cuantificados de las 4 muestras comerciales, sobre la línea celular HeLa evidenció que dos de las muestras con elevada cantidad de fibra fueron citotóxicas a concentraciones 1x; éstas fueron centrifugadas y la citotoxicidad se redujo ligeramente en una de ellas (ILGF50) a 3x pero con la segunda (ILGF100) se mantuvo a 1x. Estos resultados sugieren un posible riesgo en la inocuidad de las muestras [(1) A. vera inner leaf dehydrated powder 200X (ILGF100), (2) A. vera inner leaf blend powder 200X (ILGF50], sin embargo, es necesario realizar más estudios citotóxicos para corroborar dichos resultados e iniciar con otros 2 estudios farmacológicos para evidenciar de manera más contundente los resultados del presente trabajo. Con respecto a los resultados con la línea celular Caco-2 se analizó las muestras WLPD e ILP las cuales causaron citotoxicidad en concentraciones elevadas 5 y 10x
dc.description.tableofcontentsÍNDICE DE CONTENIDO RESUMEN.......................................................................................................................... ..1 1. INTRODUCCIÓN .................................................................................................................3 1.1 Generalidades de Aloe vera ................................................................................................ 3 1.2 Compuestos químicos principales de Aloe vera.......................................................................... 4 1.3 Estudios farmacológicos con células humanas .......................................................................... 5 1.4 Estudios farmacológicos en modelos murinos........................................................................... 6 1.5 Estudios farmacológicos en humano ..................................................................................... 8 1.6 A. vera en la industria...................................................................................................... 8 1.7 Estudios farmacológicos realizados a muestras comerciales de A. vera ........................................... 9 1.8 Alteraciones típicas metabólicas celulares............................................................................ 10 1.8.1 Apoptosis..................................................................................................................10 1.8.2 Necrosis...................................................................................................................11 1.9 Actividad antimicrobiana................................................................................................ 12 2. PLANTEAMIENTO DEL PROBLEMA......................................................................................,...14 3. JUSTIFICACIÓN...............................................................................................................14 4. OBJETIVOS ...................................................................................................................15 4.1 Objetivo general ......................................................................................................... 15 4.2 Objetivos específicos.................................................................................................... 15 5. MATERIALES Y MÉTODOS...................................................................................................16 5.1 Obtención de muestras................................................................................................. 16 5.2 Identificación molecular de la planta ............................................................................... 16 5.2.1 Extracción de ADNg a partir de tejido vegetal ...................................................................16 5.2.2 Amplificación de la región espaciadora interna transcrita 1-4 (Internal Transcribed Spacer [ITS])...........................................................................................................................17 5.2.3 Electroforesis..........................................................................................................19 5.2.4 Purificación del producto de la PCR...............................................................................19 5.2.5 Purificación con el Kit BigDye X-Terminator®....................................................................20 5.2.6 Reacción de secuenciación..........................................................................................20 5.3 Cuantificación de antronas y antraquinonas (aloína, aloe-emodina y emodina) en muestras comerciales y jugo crudo pasteurizado (Finisher) .................................................................................................... 21 6.3.1 Análisis cromatográfico de antronas y antraquinonas..........................................................21 5.3.2 Preparación de la curva de calibración con los estándares comerciales ...................................22 5.3.3 Preparación de los productos comerciales ......................................................................22 5.3.4 Preparación de los extractos crudos de la planta A. vera .....................................................22 5.4 Actividad antimicrobiana............................................................................................. 24 5.4.1 Cepas bacterianas utilizadas.......................................................................................24 5.4.2 Preparación del inóculo.............................................................................................25 5.4.3 Preparación (Estándares, Extractos y Muestras comerciales).................................................25 5.4.4 Análisis antimicrobiano por Kirby Bauer .........................................................................25 5.4.5 Susceptibilidad por microdilución ................................................................................25 5.5 Línea celular y condiciones de cultivo ............................................................................ 26 v 5.5.1 Viabilidad celular....................................................................................................26 5.5.1.1 WST-1 ..............................................................................................................27 5.5.1.2 NRU cualitativa ...................................................................................................27 5.5.1.3 NRU cuantitativa .................................................................................................27 5.5.2 Detección de necrosis..............................................................................................28 5.5.2.1 LDH.................................................................................................................28 5.5.2.2 Azul de tripano ..................................................................................................28 6. RESULTADOS ............................................................................................................29 6.1 Identificación molecular............................................................................................ 29 6.1.1 Electroforesis del ADNg ..........................................................................................29 6.1.2 Amplificación PCR.................................................................................................30 6.1.3 Árbol filogenético ................................................................................................31 6.2 Determinación de antronas y antraquinonas ...................................................................31 6.3 Actividad antimicrobiana..........................................................................................34 6.4 Efecto citotóxico de las muestras comerciales frente a las líneas celulares HeLa y Caco-2 .......... 36 6.4.1 Ensayos sobre la línea celular HeLa ..........................................................................36 6.4.2 Ensayos sobre la línea celular Caco-2........................................................................47 7. DISCUSIÓN............................................................................................................51 7.1 Identificación molecular......................................................................................... 51 7.2 Concentraciones de antronas y antraquinonas en extractos crudos metanólicos y muestras comerciales............................................................................................................ 51 vi 7.3 Actividad antimicrobiana....................................................................................... 54 7.4 Efectos citotóxicos.............................................................................................. 55 8. CONCLUSIONES ....................................................................................................58 9. BIBLIOGRAFÍA ......................................................................................................59
dc.formatapplication/PDF
dc.language.isospa
dc.publisherBiblioteca Digital wdg.biblio
dc.publisherUniversidad de Guadalajara
dc.rights.urihttps://www.riudg.udg.mx/info/politicas.jsp
dc.subjectAloe Vera
dc.titleCitotoxicidad y actividad antimicrobiana de productos comerciales semi-terminados de Aloe vera
dc.typeTesis de Maestría
dc.rights.holderUniversidad de Guadalajara
dc.rights.holderAvalos Navarro, Guadalupe
dc.coverageOCOTLAN, JALISCO
dc.type.conacytmasterThesis
dc.degree.nameMAESTRIA EN CIENCIAS
dc.degree.departmentCUCIENEGA
dc.degree.grantorUniversidad de Guadalajara
dc.rights.accessopenAccess
dc.degree.creatorMAESTRO EN CIENCIAS
dc.contributor.directorLópez López, Zaira Del Rocío
dc.contributor.codirectorRivera Sánchez, Gildardo
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