DESARROLLO DE UNA METODOLOGÍA PARA LA CUANTIFICACIÓN DE CORTISOL SANGUÍNEO EN BOVINOS MEDIANTE LA UTILIZACIÓN DE ESPECTROFOTOMETRÍA RAMAN

Abstract

RESUMEN El objetivo fue el desarrollar una nueva metodología para identificar y cuantificar la concentración de cortisol presente en suero sanguíneo de bovinos mediante la utilización de Espectrofotometría Raman. Se utilizaron 28 bovinos distribuidos en dos grupos de 14 animales cada uno. En el primero de ellos; machos encastados de cebú, recién trasportados, con un peso entre 270 y 320 kg y una edad, aproxi-mada de 12-14 meses denominado grupo estrés alto. El segundo grupo; bovinos hembras de la raza Holstein con un peso entre 380 y 400 kg, edad promedio de 40 meses, denominado grupo de estrés bajo (animales bajo condiciones de manejo lechero rutinario). Las muestras fueron tomadas de la vena yugular, siempre du-rante la mañana (11:00 a 12:00 am) y con similar manejo (arreo en corrales, suje-ción en trampa y extracción de sangre). La extracción de sangre se realizó con tubos vacutainer (20 x ½) y sin anticoagulante. Después las muestras se centrifu-garon y se obtuvo el suero, después se mantuvieron en refrigeración a -200 hasta su análisis. La identificación de cortisol en el suero se realizó mediante la obten-ción de espectrogramas en un equipo EZ-Raman-L de la sal pura (Hidrocortisona) en la sal diluida en etanol y en los sueros de los animales y la posterior identifi-cación de los picos característicos de la molécula. La cuantificación de la concen-tración se realizó mediante el cálculo del área bajo la curva del pico que mostro mayor relación con la concentración de cortisol. Así mismo se obtuvo la cuantifica-ción de la concentración de cortisol en los sueros mediante la técnica Elisa con el propósito de comparar y analizar estadísticamente su resultado con las concentra-ciones de cortisol calculada a partir de los espectrogramas. Los resultados condu-jeron a identificar la molécula de cortisol en suero de bovino con el rayo incidido a 7 mm de distancia focal, 60 segundos, 100% de la potencia del láser. Los picos característicos se reconocieron en los 1648 nm del espectro en cada muestra. El pico seleccionado fue cuantificado mediante el área debajo de la curva por medio del programa Grames Enwabe Lab Congnition (2015). La comparación de datos obtenidos de este cálculo con los obtenidos de las concentraciones de cortisol con la prueba de Elisa mostro un alta interacciones entre los dos grupos de estrés 13 alto y de igual manera los dos grupos de estrés bajo. Como conclusión se puede decir que mediante espectrofotometría Raman es posible identificar y cuantificar de manera precisa las concentraciones de cortisol sanguíneo en animales que muestran aparente estrés bajo o aparente estrés alto, inclusive con mayor sensibi-lidad para este último nivel de estrés que el que manifestó la prueba de Elisa.