Caracterización de la secuencia codificante del gen PpLAP de Physalis philadelphica

Abstract

RESÚMEN La leucina aminopeptidasa ácida (LAP-A) es una proteína que, a diferencia de su homóloga encontrada consitutivamente en todas las plantas (LAP-N), tiene un rol de defensa tardía contra herbívoros y ha sido identificada únicamente en miembros de la familia Solanaceae. El presente trabajo parte de los resultados obtenidos en el escrutinio de una biblioteca sustractiva de cDNA de tejido foliar de plantas de tomate de cáscara (Physalis philadelphica) expuestas a herbivoría por larvas de Manduca sexta, donde se identificó la secuencia de una LAP. Los análisis de expresión mostraron una acumulación del transcrito de 65 y 830 veces en plantas expuestas a herbivoría o tratadas con ácido jasmónico respectivamente, en relación con las plantas control intactas. Con el fin de caracterizar el gen PpLAP, se condujo un análisis de RACE-PCR. Este mostró que la secuencia completa, con un marco de lectura abierta de 1,785 pb, codifica para una proteína de 594 aminoácidos con las características estructurales distintivas del grupo de las leucina aminopeptidasas. Por su parte, el análisis fenético ubicó a LAP-A de Solanum lycopersicum como la más cercana a la LAP-A de tomate. Con el fin de poder inferir la función de la enzima en P. philadelphica durante futuros estudios, se clonó el gen PpLAP en el vector pB7WG2D y con la construcción se transformaron bacterias de Agrobacterium tumefaciens, las cuales posteriormente serán utilizadas para sobre expresar el gen en Arabidopsis thaliana.