Evaluación del gen FANCA mediante técnica MLPA (Multiplex Ligand-Probe Amplification) en pacientes con Anemia de Fanconi

Abstract

Introducción. La anemia de Fanconi (AF) es un trastorno hereditario, considerado dentro del grupo de los síndromes de inestabilidad cromosómica, ya que presenta falla en la reparación del ADN. La AF es una enfermedad multisistémica con múltiples anomalías cuya principal morbi-mortalidad es el desarrollo de falla de médula ósea en la primera década de vida con un aumento y predisposición a desarrollar tumores sólidos o hematológicos (OMIM 227650). Se han establecido al menos 15 subtipos genéticos, pero el 60% de los pacientes presentan mutación del gen FANCA (16q24.3), y el 59% de las mutaciones en este gen se deben a alteración en la dosis génica. La técnica MLPA es un método efectivo para la detección de un número anormal de copias mediante PCR multiplex. Evaluamos una cohorte de pacientes con AF estudiados en el Hospital Civil de Guadalajara “Dr. Juan I. Menchaca” (HCGJIM) para detectar la presencia de ganancias o pérdidas en el gen FANCA utilizando la técnica de MLPA. Materiales y métodos. Estudio descriptivo y ambispectivo realizado durante el periodo de Enero 2009 a Julio 2015 en una cohorte de pacientes atendidos por los servicios de Hemato-Oncología Pediátrica y Genética del HCGJIM con diagnóstico clínico y citogenético de AF. Para el ensayo de MLPA se utilizó el kit MLPA® SALSA p031/p032 FANCA (MCR-Holland, Amsterdam, Holanda). El análisis de los datos se hizo mediante la evaluación de picos para determinar pérdidas o ganancias utilizando el software Coffalyser®. Resultados. Se evaluaron a 14 pacientes con diagnóstico confirmado de AF, de los cuales tres se excluyeron del estudio por diferentes motivos. Se encontró en un paciente la deleción homocigota de los exones 12 al 18 del gen FANCA. Los padres de éste paciente presentaron la misma deleción en forma heterocigota. Conclusiones. Ante el diagnóstico de AF, el método MLPA puede ser utilizado como tamizaje inicial para detectar deleciones en el gen FANCA, ya que uno de cada dos pacientes con mutación en este gen va a presentar alteraciones en la dosis génica, lo que permite también la detección de portadores. Esto permite que el MLPA pueda detectar hasta un tercio de los pacientes con AF, y se puede realizar antes de iniciar otros estudios moleculares.