Patrón de distribución del receptor de citotoxicidad natural NKP30 en subclases de NK periféricas y su ligando endógeno B7H6 durante la historia natural del carcinoma invasor del cuello uterino

Abstract

INTRODUCCIÓN: Cáncer cervical ocupa el tercer lugar en incidencia y mortalidad entre los tipos de cáncer que afectan a las mujeres en México. Las células NK tienen un papel muy importante en la eliminación del tumor, se clasifican principalmente en dos subpoblaciones: CD56bright y CD56dim. El receptor NKp30, presente en células NK, se presenta en tres isoformas: a, b y c. Las primeras dos están caracterizadas por tener efectos anti-tumorales, la tercera es más inmunoreguladora. El ligando de estrés celular del receptor NKp30, B7H6, se ha reportado que conduce a la activación de las células NK y a su citotoxicidad contra células tumorales que lo expresen. B7H6 ha sido reportado también en diferentes enfermedades, como diferentes tipos de cáncer, enfermedades autoinmunes y sepsis. Sin embargo se desconoce al momento las variaciones del receptor NKp30, como la presencia de su ligando B7H6 en la historia natural del cáncer cérvico-uterino. Es posible que de manera similar a otros ligandos de activación, en forma soluble B7H6 pudiera ejercer funciones inhibitorias y también estar implicado como un marcador de progresión en cáncer. OBJETIVO: Caracterizar las isoformas del receptor en células NK periféricas, así como identificar los niveles solubles y la presencia en el cérvix del ligando endógeno B7H6, siguiendo la historia natural en el desarrollo del cáncer cérvico-uterino. MATERIALES Y MÉTODOS: Se aislaron células mononucleares de sangre periférica (PBMCS) de pacientes con cáncer cérvico-uterino, lesiones precursoras, así como de mujeres sanas. Se realizó un análisis de q RT-PCR para caracterizar las isoformas de NKp30, con el termociclador LightCycler© 96; cada isoforma se determinó con sondas específicas y primers, se normalizó con el gen de β2-microglobulina. Se utilizó la citometría de flujo multicolor para caracterizar la expresión del receptor NKp30 en subclases de células NK: CD56bright y CD56dim, usando el citómetro de flujo BD FACSCanto II® y el análisis realizado en FlowJo. Para determinar la presencia del ligando soluble, usamos ensayos de ELISA para B7H6, e inmunohistoquímica de biopsias cervicales de pacientes con lesiones precursoras, cáncer cervical y biopsias de otras causas que no fueran lesiones precursoras o cáncer cervical, como grupo control, para determinar la presencia del ligando in situ. RESULTADOS Y CONCLUSIONES: Los resultados proveen por primera vez evidencia del incremento del ligando soluble B7H6 en cáncer cervical: mientras que a nivel de mRNA, las isoformas del receptor NKp30 a y b no cambiaron con respecto al grupo control pero se observó una disminución de la isoforma inmuno-reguladora c, presentando un estatus no saludable en células NK. Hay en incremento en la frecuencia de células NK con una redistribución en las subpoblaciones: una disminución en la población CD56bright y un incremento en la población CD56dim mostrando un patrón de células NK senescentes. A nivel proteico, el porcentaje de células NK periféricas positivas a NKp30 se disminuyó y también presentando un aparente estado de inhibición por la disminución de la perforina, lo cual se ha documentado en otros tipos de cáncer, reflejando un estatus de agotamiento. Encontramos también por primera vez, en biopsias provenientes de cérvix, la presencia de B7H6 en queratinocitos transformados de lesiones intraepiteliales escamosas de alto grado, así como en células tumorales de cáncer de cérvico-uterino. La tinción fue notablemente más alta, basada en el immunoreactive score, en células tumorales de adenocarcinoma cervical, al compararlas con células tumorales de cáncer escamoso cervical. Adicionalmente se encontró B7H6 en células plasmáticas y en células mononucleares infiltradas en el estroma.