Caracterización de B7H6, un novedoso inmunoligando tumoral del receptor NKp30, durante el desarrollo del embarazo y su relevancia biológica sobre la función de las células NK

Abstract

Introducción. Una importante pregunta con respecto al embarazo es ¿por qué la unidad placento-fetal no es rechazada por el sistema inmune de la madre? Varios mecanismos han sido propuestos para poder explicar esta tolerancia; sin embargo, a la fecha esto se mantiene sujeto a un intensivo debate. Las células NK juegan un rol clave en la correcta implantación embrionaria, ya que participan en la liberación de citocinas pro-inflamatorias, quimiocinas y factores de crecimiento que permiten la migración de células del embrión, así como la inducción de angiogénesis y el acondicionamiento del nicho uterino para la llegada del mismo. La activación de las células NK está regida por un fino balance entre señales de activación y de inhibición. Los principales ligandos de activación de las células NK son conocidos como ligandos de estrés, los mejores ejemplos son MICA y ULBPs, presentes en células infectadas por virus o células transformadas, aunque se ha descrito que la placenta es una fuente importante de algunos de estos ligados. Entre los receptores clave que desencadenan la activación de células NK está NKp30, un receptor capaz de reconocer diversos ligandos tanto exógenos como endógenos. Precisamente, hace algunos años se describió un importante ligando endógeno denominado B7H6 (NCR3LG1), el cual se expresa en ambientes pro-inflamatorios durante infecciones virales, autoinmunidad y cáncer. Sin embargo, a diferencia de MICA y ULBPs, la expresión de B7H6 no ha sido aún reportada durante el desarrollo normal del embarazo. Objetivo. Por tal motivo, en el presente trabajo nos propusimos investigar si B7H6 es expresado durante el embarazo, así como su relevancia biológica sobre la función de las células NK. Metodología Para el estudio se incluyeron 36 mujeres en su segundo embarazo, sin complicaciones médicas, treinta mujeres no embarazadas pareadas en edad y sin complicaciones médicas formaron el grupo control. A cada una se les extrajo suero el cual se analizó para la búsqueda de B7H6 utilizando la técnica de Western blot y electroforesis en dos dimensiones (2DE) acoplada a espectrometría de masas. Resultados. En todas las muestras del grupo de mujeres embarazadas se detectó desde el primer trimestre la presencia de B7H6 soluble, mismo que se mantuvo a lo largo de los siguientes tres trimestres del embarazo. Por el contrario, en el grupo control no se detectó B7H6 en ninguna de las muestras. Interesantemente, B7H6 se encontró como dos isoformas, cada una con distinto peso molecular, mismas que fueron mutuamente excluyentes. Por espectrometría de masas se corroboró que los fragmentos obtenidos por electroforesis en 2DE correspondieron a la proteína B7H6. Para explicar las diferencias entre los distintos pesos mostrados por las dos isoformas, algunos sueros representativos fueron procesados con la enzima PNGasa F, la cual remueve N-glicanos, y sorprendentemente observamos que la isoforma de mayor peso (la cual denominamos isoforma pesada) no mostró ninguna variación en su peso molecular; en cambio, en la isoforma ligera tratada con la PNGase F si observamos una disminución en su peso. Así, las diferencias en peso entre ambas isoformas no necesariamente pudieron atribuirse a la presencia de residuos de N-glicanos. Debido a que una diversidad de proteínas han sido encontradas en exosomas circulantes en suero de mujeres embarazadas, el siguiente paso fue dilucidar si B7H6 soluble se liberó mediante exosomas. Nuestros resultados muestran que la isoforma pesada se localiza preferentemente en la fracción exosomal, mientras que la isoforma ligera se encuentra en la fracciones exosomal, así como en la fracción libre de exosomas, aunque con localización preferencial en esta última. Por otro lado, medimos la expresión del receptor NKp30 y la co-expresión de CD69 un marcador de activación, donde observamos que la expresión de NKp30 estuvo disminuida en el grupo de mujeres embarazadas mientras que la expresión de CD69 se mantuvo en la población CD56dim. Conclusiones. Con estos resultados demostramos que B7H6 se encuentra en forma soluble en el suero de mujeres embarazadas, mismo que se mantiene a lo largo de los tres trimestres. Además, mostramos la presencia de dos isoformas de B7H6, una pesada y otra ligera y la diferencia en pesos no fue atribuida a N-glicanos. Aunque ambas isoformas se encontraron en exosomas, la isoforma ligera se localizó en la fracción libre de exosomas. Al parecer la liberación de B7H6 se correlacionó con la disminución en la expresión de NKp30 así como un aumento en la expresión de CD69 en células NK de sangre periférica.