EFECTO DE AMINOGUANIDINA SOBRE LA FORMACIÓN DE PRODUCTOS FINALES DE GLUCOSILACIÓN AVANZADA EN RELACIÓN A LA EXPRESIÓN DE GENES IMPLICADOS EN LA FIBROGÉNESIS DURANTE LA PROGRESIÓN DE FIBROSIS RENAL EN RATAS DIABÉTICAS

Abstract

Antecedentes. La nefropatía diabética (NFPD), una complicación microvascular de la diabetes mellitus, se presenta en más del 30% de los pacientes y del 70-80% desarrollarán enfermedad renal terminal. Se caracteriza por microalbuminuria, deterioro de la tasa de filtración glomerular (GFR, por sus siglas en ingles glomerular filtration rate) y alteraciones a nivel glomerular. La hiperglucemia circulante incrementa la formación de productos finales de glucosilación avanzada (AGEs por sus siglas en inglés, Advanced glycation end products), quienes al modificar proteínas estructurales o interacción con RAGE participan en el desarrollo de la NFPD. Los AGEs también son capaces de activar genes implicados en la producción de fibrosis glomerular e intersticial. La Aminoguanidina (AG), un inhibidor de AGEs, ha demostrado disminuir el desarrollo de las complicaciones microangiopaticas en modelos experimentales de diabetes. No se conoce completamente su participación en el perfil de expresión de genes relacionados con la NFPD en modelos experimentales de diabetes mellitus tipo 2 (DM2). Objetivo. Evaluar el efecto de AG sobre la inhibición de AGEs y su relación sobre la progresión de fibrosis renal mediante la expresión de TGF-β1, CTGF, VEGF, Colágena 1 y SMAD-7 en ratas diabéticas. Métodos. Se indujo DM2 en ratas Wistar macho (200-250g), mediante 5 dosis consecutivas de STZ (20mg/kg) i.p. aunado a una dieta modificada alta en grasa y carbohidratos (DM) implementada 15 días previos a la inducción y durante todo el periodo de evaluación (25 semanas). Se consideraron diabéticos los animales con glucosa sérica ≥300mg/dL, evaluada previo a cada sacrificio, con muestras sanguíneas obtenidas mediante punción de cola en ayuno y determinadas por glucómetro ACCu-CHEK Performa®. La dieta modificada (DM) se preparó adicionando los siguientes componentes a razón de 1kg: 0.1% de colesterol, 1% de sacarosa y 10% de aceite de coco. La administración de AG fue de 20mg/kg/d i.p. durante las 25 semanas. Se realizaron sacrificios en el día basal, semana 4, 15, 20 y 25 mediante exanguinación previa anestesia con Zoletil 50® y la colocación de ratas en cajas fisiológicas por 24 horas para los parámetros fisiológicos. Se extrajeron ambos riñones para evaluar la fibrosis mediante tinción Tricrómico de Masson y el perfil de expresión génica de los genes TGF-β1, CTGF, VEGF, Colgena-1 alfa (Col-1a) y Smad-7 mediante qRT-PCR usando un sistema de detección con sondas TaqMan® mediante el aparato StepOne™ Real-Time PCR System, expresando los valores con el método 2-ΔΔCt usando β-actina como gen endógeno. El suero se utilizó para evaluar la función hepática (AST, ALT, TP, Albúmina) y función renal (Urea, Creatinina sérica y urinaria), así como para evaluar la GFR, así como la medición de los AGEs séricos mediante ELISA (Elabscience®). Análisis estadístico. Las variables cuantitativas se expresaron con medias y desviación estándar como medida de dispersión. Se analizaron con la prueba de Kruskal Wallis usando U Mann Whitney como post hoc en SPSS v.20, considerando como significativo una p ≤0.05. Resultados. El modelo implementado presentó hiperglucemia persistente, mostrando las características clínicas y bioquímicas de la DM2. El desarrollo de las alteraciones estructurales histológicas de la NFPD con fibrosis progresiva hasta la semana 25 así como un incremento en el perfil de expresión génica de TGF-β1, CTGF y Col-1a y una reducción en la expresión de Smad-7 y VEGF promoviendo la fibrogénesis. El grupo que recibió AG mostró una disminución significativa en los niveles de urea y creatinina, aminoró el desarrollo de las complicaciones histológicas de la NFPD a nivel glomerular, preservó la GFR así como modificó el perfil de expresión favoreciendo Smad-7 y VEGF y disminuyendo TGF-β1, CTGF y Col-1a de forma significativa. Conclusiones. El tratamiento con AG (20mg/kg/d) disminuyó de forma significativa los niveles séricos de AGEs sin presentar alteraciones hepáticas, estos beneficios se manifiestan con una reducción en las complicaciones bioquímicas e histológicas en el desarrollo de la NFPD aunado a una disminución de la expresión de genes implicados en la fibrogénesis con un incremento en los anti-fibrogénicos.