Detección de Salmonella y Listeria monocytogenes en carne molida de res por reacción en cadena de la polimerasa

Abstract

Para aislar e identificar bacterias de alimentos en el laboratorio se han utilizado, tradicionalmente, métodos que requieren de cinco a siete días en generar resultados. Por esta razón y teniendo en cuenta la necesidad de detectar con rapidez microorganismos en alimentos, se está implementando el uso de técnicas de Biología Molecular como la reacción en cadena de la polimerasa (PCR, por sus siglas en inglés) que permite identificar en menor tiempo (24 horas), y de manera específica dichos microorganismos. La rapidez de análisis, facilidad de la determinación, e incluso, inmediatez de la respuesta, hacen de estos protocolos una opción muy interesante como sistema de análisis previo para separar los alimentos sospechosos de los que no están contaminados. Teniendo conocimiento de lo anterior se realizó el presente trabajo en donde se estandarizaron las técnicas de PCR para Salmonella y L. monocytogenes a partir de cultivos puros y en muestras de carne molida de res inoculadas y naturalmente contaminadas. Para la extracción de DNA de la carne se empleó la extracción con lisozima, proteinaza K y fenol-cloroformo-alcohol isoamílico. La PCR se basó en la especificidad de los iniciadores Sentido-5´-CGG AGG TTC CGC AWA AGA TG-3´ y antisentido-5´-CCT CCA GAG TGA TCG ATG TT-3´, que amplifican una banda de 234 pb del gen hlyA de la listeriolisina O de L. monocytogenes y para Salmonella los iniciadores utilizados fueron: S 5´-ACC ACG CTC TTT CGT CTG G-3´ y A 5´-GAW CTG ACT ACG TAG ACG CTC-3´ del gen invA.