Por favor, use este identificador para citar o enlazar este ítem: https://hdl.handle.net/20.500.12104/112416
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dc.contributor.authorVillanueva Orozco, Bruno Ricardo
dc.date.accessioned2026-04-13T17:53:50Z-
dc.date.available2026-04-13T17:53:50Z-
dc.date.issued2025-10-31
dc.identifier.urihttps://wdg.biblio.udg.mx
dc.identifier.urihttps://hdl.handle.net/20.500.12104/112416-
dc.description.abstractLa contaminación de efluentes acuáticos por colorantes sintéticos constituye un problema ambiental y de salud pública en aumento. Debido a su alta estabilidad química y molecular, estos compuestos persisten en el ambiente, ejerciendo efectos nocivos sobre los seres humanos, la flora y la fauna, especialmente la marina. A nivel toxicológico, se asocian con el desarrollo de enfermedades cancerígenas y genéticas, mientras que, en el plano ecosistémico, su presencia inhibe la fotosíntesis de algas y eleva la demanda química de oxígeno (DQO) en los cuerpos de agua, generando hipoxia letal para la vida acuática. Debido a esto, resulta imperativo buscar alternativas para la degradación de estos colorantes que no afecten al medio ambiente. Actualmente, existen metodologías fisicoquímicas para la degradación de colorantes, como el proceso oxidativo Fenton y la ozonización. Sin embargo, estos tratamientos suelen implicar un alto consumo energético y pueden generar subproductos químicos que son, a su vez, contaminantes. Como alternativa, las técnicas biocatalíticas, que emplean microorganismos o enzimas para la biotransformación de colorantes, representan una opción más sostenible. Estos métodos no suponen un costo energético adicional significativo, ya que se centran en mantener las condiciones óptimas para la actividad biológica. Entre las enzimas más prometedoras se encuentran las lacasas, las cuales ofrecen una ruta viable para la biotransformación de colorantes sin generar sustancias de mayor toxicidad. No obstante, la principal desventaja de las enzimas libres es su baja estabilidad operacional, pues pierden actividad tras pocos ciclos de uso. Para superar esta limitación, la inmovilización enzimática se ha consolidado como una estrategia clave para mejorar su durabilidad y facilitar su reutilización. Diversos reportes han demostrado que las nanopartículas son soportes óptimos para la inmovilización, mejorando la robustez de las enzimas e incluso beneficiando la catálisis. A pesar de estos avances, existe una brecha de conocimiento en el uso de resinas de impresión 3D como matrices para inmovilizar y embeber enzimas. Esta estrategia permitiría fabricar andamios con geometrías complejas y optimizadas para la catálisis, un área escasamente explorada. La impresión 3D ofrece, por tanto, una oportunidad para crear estructuras a medida que maximicen la eficiencia en los procesos de biotransformación. En este proyecto se propone la producción de enzimas lacasas recombinantes de Bacillus subtilis y Bacillus pumilus y su posterior inmovilización en materiales enriquecidos con nanopartículas de ZnO. Estos materiales se emplearán como insumos para la impresión de objetos tridimensionales mediante tecnología de estereolitografía (SLA). El objetivo final es desarrollar un material compuesto, con alta estabilidad y capacidad de reutilización, que sea eficaz en la degradación de colorantes sintéticos.
dc.description.tableofcontentsÍndice Índice de ilustraciones ................................................................................................................... 4 Índice de tablas ............................................................................................................................. 6 Tabla de abreviaturas .................................................................................................................... 7 1. Introducción ......................................................................................................................... 10 2. Antecedentes ....................................................................................................................... 13 2.1. Colorantes .................................................................................................................. 13 2.2. Degradación de colorantes ........................................................................................ 14 2.3. Biocatálisis y enzimas ................................................................................................ 15 2.3. Lacasas ................................................................................................................. 16 2.4. Inmovilización de enzimas ......................................................................................... 19 2.5. Nanopartículas para inmovilizar enzimas .................................................................. 22 2.5. Nanopartículas de Oxido de Zinc .......................................................................... 23 2.6. Impresión 3D de materiales ....................................................................................... 26 2.7. Impresión 3D para inmovilizar lacasas ...................................................................... 28 3. Problemática ........................................................................................................................ 30 4. Hipótesis .............................................................................................................................. 33 5. Objetivos: General y específicos ......................................................................................... 33 5.1. Objetivos generales. .................................................................................................. 33 5.2. Objetivos específicos. ................................................................................................ 33 6. Metodología ......................................................................................................................... 35 6.1. Síntesis y Caracterización de las ZnONPs. ............................................................... 35 6.1.1 Síntesis de las ZnONPs. ............................................................................................ 35 6.1.2 Caracterización de las ZnONPs................................................................................. 36 6.1.2.1 Difracción de Rayos X ........................................................................................... 36 6.1.2.2 Microscopía Electrónica de Transmisión (TEM) .................................................... 36 6.1.2.3 Espectroscopia de infrarrojo por Transformada de Fourier (FTIR-ATR) ............... 36 6.1.2.4 Espectroscopia de RAMAN ................................................................................... 37 6.2 Dispersión de las ZnONPs en la resina de impresión. .............................................. 37 6.2.1 Caracterización de la dispersión de ZnONPs en la resina mediante microscopio óptico. 37 6.2.2 Caracterización de la dispersión de ZnONPs en la resina mediante fluorescencia de Rayos X (XRF). ....................................................................................................................... 38 6.3 Fabricación del material impreso. .............................................................................. 38 6.3.1 Diseño para la impresión 3D del material. ................................................................. 38 6.3.2 Caracterización del material impreso......................................................................... 39 6.3.2.1 Comparación visual entre las resinas (sin modificar y modificadas). .................... 39 6.3.2.2 Evaluación preliminar de las propiedades mecánicas del material impreso. ........ 39 6.3.2.3 Evaluación de la distribución de las ZnONPs en el material durante la impresión. 40 6.4 Producción de enzimas lacasas recombinates. ......................................................... 40 6.4.1 Selección y adquisición de genes candidatos ........................................................... 40 6.4.2 Transformación y verificación del plásmido mediante restricción. ............................ 41 6.4.3 Expresión en E. coli BL21(DE3) ................................................................................ 42 6.4.4 Purificación y caracterización enzimática. ................................................................. 42 6.5 Inmovilización de enzimas lacasas en ZnONPs y dispositivos 3D ............................ 43 6.5.1 Validación preliminar con GFP .................................................................................. 43 6.5.2 Análisis espectroscópico de inmovilización ............................................................... 43 6.5.3 Inmovilización en dispositivos 3D modificados con ZnONPs .................................... 43 6.5.4 Evaluación del material inmovilizado ......................................................................... 43 7 Resultados y discusión ........................................................................................................ 46 7.1 Síntesis de nanopartículas ......................................................................................... 46 7.1.1 Caracterización de las ZnONPs por XRD .................................................................. 46 7.1.2 Caracterización de las ZnONPs por TEM .................................................................. 47 7.2 Fabricación del material ............................................................................................. 52 7.2.1 Preparación de la mezcla ZnONPs/Resina ............................................................... 52 7.2.2 Diseño de dispositivo ................................................................................................. 56 7.2.3 Pruebas del material .................................................................................................. 57 7.2.4 Impresión 3D .............................................................................................................. 60 7.3 Producción de las enzimas lacasas ........................................................................... 63 7.3.1 Selección de enzimas lacasas B. pumilus y B. subtilis ......................................... 63 7.3.2 Verificación de las construcciones pet28A::Lac_Bpum & pet28A::Lac_Bsub....... 66 7.3.3 Optimización de la expresión de pet28A::Lac_Bpum. ........................................... 69 7.3.4 Caracterización de las enzimas lacasas B. pumilus y B. subtilis .......................... 72 7.4 Inmovilización de las enzimas lacasas ...................................................................... 74 7.5 Retención de la actividad catalítica de las lacasas en el material impreso. .............. 77 7.6 Evaluación de la capacidad de degradación de hematoxilina. .................................. 79 8 Conclusiones ....................................................................................................................... 82 8.1 Perspectiva ................................................................................................................ 83 9 Bibliografías ......................................................................................................................... 85 10 Anexos ............................................................................................................................ 93
dc.formatapplication/PDF
dc.language.isospa
dc.publisherBiblioteca Digital wdg.biblio
dc.publisherUniversidad de Guadalajara
dc.rights.urihttps://www.riudg.udg.mx/info/politicas.jsp
dc.subjectInmovilizacion De Lacasas
dc.subjectNanoparticulas De Zno Embebidas
dc.subjectResina Acrilica
dc.subject3D
dc.subjectDegradacion
dc.subjectColorantes Sinteticos
dc.titleInmovilización de lacasas en nanopartículas de ZnO embebidas en resina acrílica impresa en 3D para la degradación de colorantes sintéticos
dc.typeTesis de Maestría
dc.rights.holderUniversidad de Guadalajara
dc.rights.holderVillanueva Orozco, Bruno Ricardo
dc.coverageGUADALAJARA, JALISCO
dc.type.conacytmasterThesis
dc.degree.nameMAESTRIA EN CIENCIAS EN QUIMICA
dc.degree.departmentCUCEI
dc.degree.grantorUniversidad de Guadalajara
dc.rights.accessopenAccess
dc.degree.creatorMAESTRO EN CIENCIAS EN QUIMICA
dc.contributor.directorVelázquez Juárez, Gilberto
dc.contributor.codirectorZamudio Ojeda, Adalberto
dc.contributor.codirectorRenteria Urquiza, Maite
Aparece en las colecciones:CUCEI

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