Mecanismos moleculares asociados con la sobreexpresión de FOXP3 en queratinocitos no tumorigénicos y células derivadas de cáncer cervicouterino

Abstract

INTRODUCCIÓN. El cáncer cervicouterino (CaCU) se reconoce como en cuarto lugar en mortalidad en enfermedades oncológicas en mujeres mexicanas. Su principal factor de riesgo es la infección persistente por genotipos de virus de papiloma humano (VPH) de alto riesgo, como lo son los genotipos -16 y -18, responsables de más del 70% de los casos de CaCU; estos son capaces de manipular la maquinaria celular y el sistema inmune para promover la transformación celular. Dentro de estos efectos transformantes se detecta el incremento de la expresión de FOXP3, un factor transcripcional clave implicado en la biología de células T reguladoras, sin embargo, en CaCU su rol biológico aún resulta desconocido. MATERIALES Y MÉTODOS. A partir de bases de datos de acceso libre de muestras de CaCU se analizaron los niveles de expresión de FOXP3, así como las variantes expresadas. A continuación, se realizó la detección de FOXP3 en líneas celulares derivadas de CaCU positivas a los genotipos de VPH más frecuentes. A partir de una estas líneas celulares se realizó la clonación del marco de lectura de FOXP3 y se estableció un modelo celular de expresión exógena. Posterior a la validación del modelo se realizaron análisis funcionales para determinar el efecto de FOXP3 en la proliferación, la migración y la división celular. Finalmente, se realizó una secuenciación de nueva generación del modelo celular para identificar los genes diferencialmente expresados, así como, las vías biológicas moduladas por FOXP3. RESULTADOS. Los análisis de las bases de datos mostraron que la expresión de FOXP3 se encuentra incrementada en muestras de CaCU en comparación con muestras de tejido normal, adicionalmente, las variantes expresadas en mayor proporción en estas muestras son FOXP3Δ2, FOXP3Δ7 y una variante identificada como FOXP3 X1. Por otra parte, la evaluación de líneas celulares positivas a VPH demostraron que no existe una relación entre el incremento de FOXP3 y el virus; a partir de la línea celular evaluada, SiHa, se realizó la clonación de la variante FOXP3Δ2Δ7 y se estableció con éxito el modelo celular en queratinocitos no tumorigénicos HaCaT, como se demostró por qPCR. Los resultados de los análisis funcionales, demostraron que el efecto de la sobreexpresión de FOXP3 promueve la proliferación, división y migración celular, y por su parte, el análisis del transcriptoma permitió identificar el incremento en la expresión de múltiples genes asociados con funciones protumorales, y el análisis de enriquecimiento

mostró la activación de vías de señalización relacionadas con la modulación del sistema inmunológico, así como de vías oncogénicas. DISCUSIÓN. Los resultados de estos análisis indican que la expresión de FOXP3Δ2Δ7 en células epiteliales induce el establecimiento de características protumorales, además de detonar una serie de eventos moleculares que poseen el potencial de promover el cáncer.