“Participación de GPER en la proliferación y apoptosis de las células C6 de glioblastoma”

Abstract

El glioblastoma es el tumor primario más frecuente de los tumores cerebrales. Las células tumorales de glioblastoma expresan la enzima aromatasa y los receptores de estrógenos α y ß y pueden producir estrógenos localmente que promueven el crecimiento del tumor. El receptor de estrógenos acoplado a proteina G (GPER) tiene un papel muy significativo en muchos tipos de cáncer sin embargo, su participación en el desarrollo del glioblastoma ha recibido poca atención. En este trabajo se estudió el rol de GPER, sus agonistas (estradiol y G1) y su antagonista (G15) sobre las células C6 de glioblastoma murino. La expresión de GPER se evaluó mediante inmunofluorescencia, Western blot y RT-qPCR. La proliferación celular se valoró a través de la inmunopositividad para Ki67 y la viabilidad celular mediante un ensayo de MTT. La apoptosis se valoró mediante la determinación de caspasa 3 a través de inmunofluorescencia, ELISA y RT-qPCR. Además se evaluó la expresion de Bax y Bcl-2 mediante RT-qPCR. Las células C6 expresan el receptor GPER y la inmunopositivad a esta proteína aumentó después de la exposición de las células a E2 (10 nM), G1 (10 nM) o a su combinación. La expresión proteinica de GPER evaluada por Western blot aumentó despues del tratamiento con E2 combinado con G1. Sin embargo, la expresión del ARNm de GPER disminuyó después del tratamiento con sus agonistas. El porcentaje de celulas en proliferación (células inmunopositivas para Ki67) incrementó con el tratamiento de E2 en combinación con G1 o G1 solo. Además, se observó una correlación de Pearson positiva entre la expresión de GPER y la proliferación de las células C6 (Ki67). Adicionalmente, el ensayo de MTT demostró

7 una reducción significativa en la viabilidad celular en las células tratadas con G15 solo o en combinación con G15 . La exposición de las células a G15 aumentó la apoptosis (células inmunopositivas a caspasa-3), los niveles de caspasa-3 y el índice Bax/Bcl-2. Se observó una correlación de Pearson negativa entre la expresión de GPER y la apoptosis de las células C6 (Caspasa-3). Y una correlación positiva entre el indice Bax/Bcl-2 y la expresión de caspasa-3. En conclusión, reportamos por primera vez la expresión de GPER en las células C6 de glioblastoma. Los agonistas de GPER favoren la proliferación, mientras que el antagonista G15 reduce la proliferación, viabilidad celular y favorece la apoptosis de las células C6. Por lo anterior, GPER podría ser utilizado como biomarcador del crecimiento tumoral y representa un blanco para desarrollar nuevas estrategias terapéuticas para el tratamiento del glioblastoma.